Avaliação de danos genéticos e apoptose em mulheres menopausadas que fazem uso da terapia de reposição hormonal / Assessment of genetic damage and apoptosis in postmenopausal women under hormone replacement therapy

Objetivo: Avaliar por meio do teste de micronúcleo em células esfoliadas da mucosa oral a genotoxicidade de hormônios empregados na terapia de reposição hormonal (TRH). Material e métodos: Quarenta mulheres menopausadas foram selecionadas e distribuídas em quatro grupos de dez: G0 (não submetidas à TRH), G1 (TRH com estrógeno), G2 (TRH com estrógeno e progestágeno) e G3 (TRH com tibolona). Células esfoliadas da mucosa oral foram coletadas e processadas para análise, sob microscopia óptica, de danos cromossômicos (micronúcleos) e de apoptose, inferida pelo somatório de alterações nucleares degenerativas (picnose, cariorréxis e cromatina condensada). Duas mil células foram analisadas por participante. A análise estatística foi feita com o uso do teste condicional para comparação de proporções em situação de eventos raros. Resultados: A frequência de micronúcleo não diferiu entre os grupos (p > 0,05). As alterações nucleares indicativas de apoptose foram significativamente mais altas entre as mulheres do G0 em relação às dos demais grupos (p < 0,01). Os grupos submetidos à TRH não diferiram quanto à ocorrência de apoptose (p > 0,05). Conclusões: Esses resultados indicam que, tal como avaliado neste estudo, a TRH não induz danos cromossômicos. Entretanto, devido ao efeito antiapoptótico, permite a proliferação de células geneticamente danificadas, está assim potencialmente associada ao processo de transformação maligna.(AU)

Objective: To evaluate through the micronucleus test in exfoliated cells of oral mucosa the genotoxicity of hormones used in hormone replacement therapy (HRT). Material and methods: Forty postmenopausal women were selected and divided into four groups of ten: G0 (not submitted to HRT), G1 (HRT with estrogen), G2 (HRT with estrogen and progestogen) and G3 (HRT with tibolone). Exfoliated cells of oral mucosa were collected and processed for analysis of chromosomal damage (micronuclei) and apoptosis, inferred by the sum of nuclear degenerative alterations (picnosis, cariorréxis and condensed chromatin). Two thousand cells were analyzed by participant. Statistical analysis was performed using the conditional test to compare proportions in a situation of rare events. Results: The frequency of micronuclei did not differ between groups (p > 0.05). Apoptotic cells were significantly higher among women from G0 when compared to the other groups (p < 0.01). The groups submitted to HRT did not differ in apoptosis occurrence (p > 0.05). Conclusions: These results indicate that, as assessed in this study, TRH does not induce chromosomal damage, however, due to the anti-apoptotic effect, cells genetically damaged can proliferate, favoring the malignant transformation process.(AU)

Allopregnanolone prevents memory impairment: effect on mRNA expression and enzymatic activity of hippocampal 3-α hydroxysteroid oxide-reductase.

In this work we investigated how the neurosteroid allopregnanolone can modulate learning and memory processes. For this purpose, we used ovariectomized (OVX) rats subcutaneously injected with oestradiol benzoate (E) alone or E and progesterone (P). Then, rats were injected in dorsal hippocampus with allopregnanolone or vehicle. Animals were tested in inhibitory avoidance task (IA task). After behavioural test hippocampal mRNA expression and enzymatic activity of 3α-HOR, the enzyme responsible of allopregnanolone synthesis, were analysed. In IA task OVX-EP rats spent less time on platform, compared to those OVX or OVX-E. Regression analyses revealed that there was a significant negative relationship between E-P infusion and performance in this task. Pre-training allopregnanolone administration to OVX-EP rats increased the time spent on the platform. Interestingly, when enzymatic activity of 3α-HOR was tested, OVX-EP rats showed a significant decrease in the enzymatic activity, compared with OVX and OVX-E rats. In addition, OVX-EP group showed a significant increase in the enzymatic activity after intrahippocampal infusion of allopregnanolone. On the other hand, when mRNA expression of 3α-HOR was analysed no differences were observed when the hippocampal allopregnanolone injection was done. These results suggest that E and P have amnesic effects on female rats, being reversed by allopregnanolone through its modulation on hippocampal 3α-HOR activity.

Desenvolvimento físico e capacidade reprodutiva de crias de ratas, tratadas com progesterona durante a lactação: [revisão] / Physical developement and reproductive capacity of offsprings from rat treated with progesterone during lactations: [review]

A progesterona (p) é um dos hormônios usados como contraceptivo durante a lactação humana, porém desconhecem-se estudos realizados com o propósito de avaliar, em animais de laboratório, o potencial tóxico sobre o desenvolvimento de crias. Neste trabalho avalia-se, em crias de ratas, amamentadas por mães tratadas com progesterona durante a lactação: o desenvolvimento físico aos 90 dias de vida, a capacidade reprodutiva e o desenvolvimento da gestação. Ratas lactando foram tratadas com P (1 mg/ dia/8 dias / via subcutânea) (grupo �ra�ado) ou com óleo de oliva (0,1 ml /dia / 8 dias / via subcutânea) (grupo controle). As crias foram desmamadas aos 24 dias e distribuídas em grupos para os seguintes estudos (a) morfometria aos 90 dias; (b) capacidade reprodutiva (c) evolução da geração. Para o ítem a avaliaram-se: peso corporal, de fígado, de rins, dos pulmões e dos cérebros; medidas do comprimento do corpo, da cauda, amplitude e distância inter-auricular. Para o ítem b estudaram-se: peso da gestante no 1º, 10º e 21º dias; número de fetos vivos, mortos e reabsorções no 21º dia de gestação. Peso de ovários e número de corpos lúteos. Para o ítem c foram analisados os pesos maternos nos dias 1º, 16º, 18º e 20º. Os animais foram sacrificados em lotes nos dias 16, 18 e 20 de gestação. Nestas datas foram obtidos, peso de ovários maternos e número de corpos lúteos por ovários; número de fetos vivos, mortos e reabsorções. Peso e comprimento dos fetos. As únicas alterações ocorreram em machos de F1 do grupo tratado que apresentaram distância interauricular, amplitude e peso renal inferiores (p < 0.01) aos controles. Mas os dados não são conclusivos. A conclusão do trabalho é de que nas doses utilizadas, as crias de ratas tratadas com progesterona não parecem diferir crias de grupo controle quanto ao desenvolvimento físico e à capacidade reprodutiva.

Nuevas líneas celulares de cáncer de mama con receptores hormonales: su utilidad en la evaluación de compuestos terapéuticos / New cell lines of breast cancer with hormonal receptors: its utility in the therapeutic compounds evaluation

La mayoría de los cánceres de mama humanos son carcinomas ductales que expresan receptores hormonales, transitan por distintos estadios de hormono-dependencia y dan metástasis a distancia. No existen modelos experimentales cuyos tumores reúnan todas estas características. El modelo de inducción de carcinomas mamarios inducidos por acetato de medroxiprogesterona en el ratón, desarrollado hace años en nuestro laboratorio, es muy adecuado ya que la mayoría de los tumores inducidos son ductales, desarrollan metástasis en ganglios axilares y en pulmón, expresan altos niveles de receptores de estrógenos y progesterona cumple un rol proliferativo, mientras que en los tumores humanos, si bien cada vez hay más evidencias que sugieren que esta hormona cumple un rol importante, se les ha adjudicado a los estrógenos el rol protagónico. El objetivo de nuestras líneas de trabajo en general está orientada a jerarquizar el rol de los progestágenos en cáncer de mama. Para que un modelo experimental resulte interesante, debe reproducir en forma fidedigna la enfermedad humana y tener características intrínsecas tales como reproducibilidad, bajo costo, posibilidad de estudios in vitro, y uso de animales estándar. Nuestro modelo permite la posibilidad de diseñar estudios de carcinogénesis hormonal para evaluar cofactores que afecten el desarrollo de los tumores... (TRUNCADO)

Nuevas líneas celulares de cáncer de mama con receptores hormonales: su utilidad en la evaluación de compuestos terapéuticos / New cell lines of breast cancer with hormonal receptors: its utility in the therapeutic compounds evaluation

La mayoría de los cánceres de mama humanos son carcinomas ductales que expresan receptores hormonales, transitan por distintos estadios de hormono-dependencia y dan metástasis a distancia. No existen modelos experimentales cuyos tumores reúnan todas estas características. El modelo de inducción de carcinomas mamarios inducidos por acetato de medroxiprogesterona en el ratón, desarrollado hace años en nuestro laboratorio, es muy adecuado ya que la mayoría de los tumores inducidos son ductales, desarrollan metástasis en ganglios axilares y en pulmón, expresan altos niveles de receptores de estrógenos y progesterona cumple un rol proliferativo, mientras que en los tumores humanos, si bien cada vez hay más evidencias que sugieren que esta hormona cumple un rol importante, se les ha adjudicado a los estrógenos el rol protagónico. El objetivo de nuestras líneas de trabajo en general está orientada a jerarquizar el rol de los progestágenos en cáncer de mama. Para que un modelo experimental resulte interesante, debe reproducir en forma fidedigna la enfermedad humana y tener características intrínsecas tales como reproducibilidad, bajo costo, posibilidad de estudios in vitro, y uso de animales estándar. Nuestro modelo permite la posibilidad de diseñar estudios de carcinogénesis hormonal para evaluar cofactores que afecten el desarrollo de los tumores... (TRUNCADO)(AU)

Respuesta a la terapia hormonal y expresión diferencial de isoformas de receptor de progesterona en carcinomas mamarios experimentales / Response to the hormonal therapy and differential expression of progesterone receptor isoforms in experimental mammary carcinomas

Una de las problemáticas más importantes del cáncer de mama es la transición de tumores de estadíos hormono-dependientes a independientes, con la consecuente insensibilidad a tratamientos hormonales. Durante los últimos años el trabajo del Laboratorio de Carcinogénesis Hormonal ha estado enfocado en el estudio de la función de los receptores de progesterona (RP) como inductores de proliferación, en el modelo experimental de cáncer de mama inducido por acetato de medroxiprogesterona (MPA) en el ratón. Así, hemos demostrado que el RP constituye un punto hacia el cual convergen varias vías estimulatorias. Nuestros datos muestran que además de por sus ligandos específicos, los RP pueden ser utilizados por factores de crecimiento tales como el FGF (Fibroblast Growth Factor) (1). Esto explicaría el porqué de la persistencia de la expresión de estos receptores en tumores que no requieren de los progestágenos para crecer y aporta datos interesantes para comprender mecanismos de plasticidad con que la célula neoplásica adopta estrategias de supervivencia que le permiten predominar sobre las normales. En este trabajo mostramos por primera vez evidencias que asocian la expresión diferencial de isoformas del RP con la capacidad de los tumores de responder al tratamiento con estradiol (E2) o antiprogestágenos en nuestro modelo experimental. Se estudiaron 6 líneas tumorales progestágeno-dependientes y 8 líneas independientes derivadas de las primeras, utilizando técnicas de "inmunoblotting"...(TRUNCADO)

Respuesta a la terapia hormonal y expresión diferencial de isoformas de receptor de progesterona en carcinomas mamarios experimentales / Response to the hormonal therapy and differential expression of progesterone receptor isoforms in experimental mammary carcinomas

Una de las problemáticas más importantes del cáncer de mama es la transición de tumores de estadíos hormono-dependientes a independientes, con la consecuente insensibilidad a tratamientos hormonales. Durante los últimos años el trabajo del Laboratorio de Carcinogénesis Hormonal ha estado enfocado en el estudio de la función de los receptores de progesterona (RP) como inductores de proliferación, en el modelo experimental de cáncer de mama inducido por acetato de medroxiprogesterona (MPA) en el ratón. Así, hemos demostrado que el RP constituye un punto hacia el cual convergen varias vías estimulatorias. Nuestros datos muestran que además de por sus ligandos específicos, los RP pueden ser utilizados por factores de crecimiento tales como el FGF (Fibroblast Growth Factor) (1). Esto explicaría el porqué de la persistencia de la expresión de estos receptores en tumores que no requieren de los progestágenos para crecer y aporta datos interesantes para comprender mecanismos de plasticidad con que la célula neoplásica adopta estrategias de supervivencia que le permiten predominar sobre las normales. En este trabajo mostramos por primera vez evidencias que asocian la expresión diferencial de isoformas del RP con la capacidad de los tumores de responder al tratamiento con estradiol (E2) o antiprogestágenos en nuestro modelo experimental. Se estudiaron 6 líneas tumorales progestágeno-dependientes y 8 líneas independientes derivadas de las primeras, utilizando técnicas de "inmunoblotting"...(TRUNCADO)(AU)

Progesterone induction of mammary carcinomas in BALB/c female mice. Correlation between progestin dependence and morphology.

We have demonstrated that medroxyprogesterone acetate (MPA), when administered in high doses, induces mammary carcinomas in virgin female BALB/c mice. Since one of the possible explanations for this effect was its progestagenic effects, we decided to investigate whether progesterone (Pg) alone could also induce mammary adenocarcinomas in our model and if MPA at doses lower than those used to establish the model was also carcinogenic. A total of 136 mice were subdivided into 3 groups: Group 1, 44 mice were implanted s.c. with 40 mg Pg silastic pellets at the beginning of the experiment, and 6 months later with a 20 mg Pg pellet; Group 2, 45 mice were similarly treated with MPA pellets; Group 3, 47 mice were inoculated s.c. with 40 mg MPA every three months. At the end of 20 months, 9 animals had developed mammary tumors in Group 1, 18 in Group 2 and 34 in Group 3 (actuarial incidence = 28%, 58%, and 98%, respectively); tumor latency was similar in all groups: 46.2 +/- 13.1, 51.3 +/- 9.9, and 50.1 +/- 2.1 weeks, respectively. Seven (Group 1), 14 (Group 2), and 25 (Group 3) tumors were transplanted into syngeneic mice to determine progestin dependence. All tumors, except one from Group 1, were histologically characterized. In Group 1 (Pg 60 mg), 4 tumors (67%) were infiltrating lobular carcinomas and 2 were ductal carcinomas (33%). In Group 2 (MPA 60 mg), 2 tumors (14%) were lobular and 12 were ductal adenocarcinomas (86%) (Group 1 vs Group 2: p < 0.05), whereas in Group 3 (MPA 160 mg), 8 were lobular carcinomas (32%) and 17 were ductal carcinomas (68%). In syngeneic passages all lobular tumors behaved as progestin independent (PI) and ductal tumors as progestin dependent (PD). All ductal tumors, except one, expressed estrogen receptors (ER) and progesterone receptors (PR), whereas receptor expression was variable in lobular carcinomas. It can be concluded that Pg induces mostly lobular, PI mammary tumors in BALB/c female mice. The fact that most MPA-induced tumors are ductal and PD suggests that the two hormones use different carcinogenic pathways.

Hormone dependence of a mouse mammary tumor line induced in vivo by medroxyprogesterone acetate.

The administration of MPA to virgin female BALB/c mice led to the development of mammary adenocarcinomas, which in further in vivo transplants gave rise to both MPA-dependent and MPA-independent lines. In this paper we chose one of the MPA-dependent lines with high contents of estrogen (ER) and progesterone (PR) receptors, and were able to demonstrate that a) the growth of these tumors could be manipulated by the administration or the withdrawal of the hormonal supply; b) PR were down-regulated in MPA-treated mice; c) progesterone had the same stimulatory effect as MPA on tumor growth; d) tumors did not grow in estrogen-treated mice; e) tumor growth was much lower in males than in females; f) the presence of the ovaries had a positive influence on tumor growth, even in the presence of MPA; g) the withdrawal of progestin pellets in ovariectomized mice usually led to complete remissions followed by regrowth of the tumors after several weeks; and h) the regrowing tumors maintained their steroid receptor pattern and (in 3 out of 4 cases) their hormone-dependent behavior in further passages.