Sensibilidad in vitro de aislados del complejo Paracoccidioides spp a antifúngicos sistémicos utilizando el método de microdilución / In vitro susceptibility of isolates of Paracoccidioides spp complex to systemic antifungals using the microdilution method

El método de referencia, microdilución en caldo, recomendado por el Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorios (CLSI), no está disponible para hongos dimórficos, como los del género Paracoccidioides. En este trabajo se evaluó la sensibilidad in vitro del Complejo Paracoccidoides (n=19) frente a los antifúngicos sistémicos: anfotericina B, 5-fluorocitosina, ketoconazol, itraconazol, fluconazol, voriconazol y caspofungina empleando el método de microdilución (Documento M27-A3 y M27-S3), con algunas modificaciones: tiempo de cultivo en medio de Sabouraud dextrosa agar (7-10 días), medio RPMI 1640 suplementado con glucosa al 2%, tiempo de incubación (7, 8 y 18 días). La sensibilidad in vitro fue variable; la mayoría de los aislados de Paracoccidioides fueron sensibles a ketoconazol (73,7%), seguido de voriconazol (68,4%), itraconazol (63,1%), anfotericina B (52,6%), fluconazol (47,4%), 5-fluorocitosina (42,1%) y caspofungina (5%). La resistencia global fue mayor ante caspofungina (94,7%), seguido de 5-fluorocitocina (52,6%) and anfotericina B (47,4%). El 53% de los aislados fue sensible dosis dependiente a fluconazol, 15,7%, itraconazol y 5,3% a 5-fluorocitosina. Anfotericina B, itraconazol y voriconazol fueron los antifúngicos más potentes contra Paracoccidioides spp (CMI: 0,03-1µg/mL). Basándose en estos resultados, se propone tentativamente un protocolo de ensayo de microdilución para las pruebas de sensibilidad de Paracoccidioides spp frente a fármacos antimicóticos. Esta metodología podría ser clínicamente útil para predecir el desarrollo de resistencias, aunque son necesarios más estudios.

Broth microdilution, the reference method recommended by the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), is not available for use with dimorphic fungi, such as those of the Paracoccidioides genus. In this work, in vitro susceptibility of the Paracoccidioides complex (n=19) to systemic antifungals: amphotericin B, 5-flucytosine, ketoconazole, itraconazole, fluconazole, voriconazole and caspofungin, was evaluated using the microdilution method (Document M27-A3, M27-S3), with some modifications such as: culture time in Sabouraud dextrose agar (7-10 days), RPMI 1640 medium supplemented with 2% glucose and the incubation time (7, 8 and 18 days). The sensitivity in vitro was variable; the majority of Paracoccidioides isolates was susceptible to ketoconazol (73.7%), followed by voriconazole (68.4%), itraconazole (63.1%), amphotericin B (52.6%), fluconazole (47.4%), 5-flucytosine (42.1%) and caspofungin (5%). The overall resistance was mainly to caspofungin (94.7%), followed by 5-flucytosine (52.6%) and amphotericin B (47.4%). Fifty-three percent of the isolates were susceptible-dose dependent to fluconazole followed by itraconazole (15.7%) and 5-fluorocytosine (5.3%). Amphotericin B, itraconazole and voriconazole were the most potent antifungal drugs against Paracoccidioides spp (CMI: 0.03-1µg/mL). Based on these results, we tentatively propose a microdilution assay protocol for susceptibility testing of Paracoccidioides spp to antifungal drugs. This method may be clinically useful to predict resistance, even though further studies are needed.

Tuberculosis y micosis sistémicas en indígenas del Municipio Cedeño Estado Bolívar Venezuela / Tuberculosis and systemic mycoses in indigenous Cedeño Municipality Bolivar State Venezuela

Determinar la prevalencia de tuberculosis y micosis sistémicas endémicas, Paracoccidioidomicosis e Histoplasmosis, en poblaciones indígenas. Se realizó un estudio transversal en pacientes sintomáticos respiratorios de 3 comunidades indígenas del municipio Cedeño del estado Bolívar, Venezuela. Se obtuvieron muestras de esputo y secreción ganglionar para la búsqueda de bacilos ácido-resistentes, el complejo Paracoccidioides sppe Histoplasma capsulatum; se realizó cultivo en medio Lowëstein Jensen y medios selectivos para hongos, además estudio molecular para micobacterias. Se estudiaron muestras de suero para la demostración de anticuerpos específicos contra el Complejo Paracoccidioides sppe H. capsulatum. Se evaluaron 60 pacientes sintomáticos respiratorios. Se demostraron bacilos ácido-resistentes por baciloscopia en 26 casos (43,3%) y 29 cultivos positivos para Mycobacterium tuberculosis (48,3%) resultando un total de 33 pacientes con diagnóstico de tuberculosis; hubo correlación significativa entre los hallazgos en el Ziehl-Nielsen y el crecimiento de M. tuberculosis en cultivo (p=0,013). Se demostró la presencia del Complejo Paracoccidioides spp en 2 casos (3,3%), con coexistencia de bacilos ácido-resistentes. No se evidenció la presencia de H. capsulatum. La tuberculosis constituye la principal causa de infección respiratoria crónica en estas comunidades indígenas y obliga a que se revisen de forma urgente los programas regionales para la atención de estas poblaciones vulnerables, así como a realizar estudios en otras poblaciones.

To determine prevalence of tuberculosis and endemic systemic mycoses, Paracoccidiodomycosis (PCM) and Hystoplasmosis in native populations. A transversal study in individuals with respiratory symptoms from 3 native populations from Cedeño County from Bolivar state, Venezuela, was realized. Sputum and spontaneous lymphatic node secretion samples were obtained to look for acid-resistant bacilli, Paracoccidioides spp complex and Histoplasma capsulatum. Culture in Lowëstein-Jensen and selective media to fungi, andmolecular study formycobacteria were realized. Serum samples were studied to demonstrate specific antibodies against Paracoccidioides spp complex and H. capsulatum. Sixty individuals had respiratory symptoms. Acid-resistant bacilli were demonstrated in 26 cases by bacilloscopy (43.3%) and 29 positive cultures for Mycobacterium tuberculosis (48.3%), resulting 33 patients with diagnosis of tuberculosis; there was significative correlation between features in bacilloscopy and growing of M. Tuberculosis in Lowëstein-Jensen media (p=0.013). Presence of the characteristic yeastlike forms of Paracoccidioides spp complex was found in 2 cases (3.3%) with coexistence of acidresistant bacilli in both. There was no evidence of H. capsulatum. Tuberculosis constitutes the principal origin of chronic respiratory infection in these native populations and it should conduce to revise urgently the regional programs attending to these vulnerable populations.

Seroprevalencia de citomegalovirus (CMV) en pacientes infectados con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en el estado Bolívar, Venezuela / Cytomegalovirus (CMV) seroprevalence in patients infected with human immunodeficiency virus (HIV) at Bolivar State, Venezuela

El citomegalovirus (CMV) es un agente patógeno ampliamente distribuido en la naturaleza que puede causar infecciones primarias, latentes, crónicas y persistentes. Con el objetivo de determinar la seroprevalencia de CMV en pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana y/o con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida, en el estado Bolívar (Venezuela), se realizó un estudio de corte transversal, donde se detectaron anticuerpos IgG contra CMV mediante ensayo inmunoenzimático en 83 pacientes. Ningún paciente presentó hallazgo clínico de infección del sistema nervioso central. El 94% (n=78) de los pacientes presentó anticuerpos de tipo IgG contra CMV, predominando en el grupo de 20-29 años (n=28; 36,1%) y en el sexo masculino (n=42; 53,8%). Se demostró una seroprevalencia mayor en los pacientes con contaje de linfocitos CD4+ entre 100-200 células/mm³. Se observó asociación estadísticamente significativa entre el incremento de la edad con los títulos de anticuerpos IgG-CMV (p=0,009). La infección por CMV tiene una prevalencia elevada en los pacientes infectados por el virus de inmunodeficiencia humana del estado Bolívar (Venezuela), incrementándose proporcionalmente con la edad.

Cytomegalovirus (CMV) is a pathogenic agent widely distributed in nature which can produce primary, latent, chronic and persistent infections. With the purpose of determining CMV seroprevalence in patients infected with human immunodeficiency virus and/or with acquired immunodeficiency syndrome at Bolivar State in Venezuela, we carried out a transversal section study where we detected anti-CMV IgG antibodies by an immunoenzymatic assay in 83 patients. None of the patients presented clinical findings indicating central nervous system infection. Of the 83 patients, 94% (n=78) showed anti-CMV IgG type antibodies, predominating in the 20-29 years group (n=28, 36.1%), and in male sex (n=42, 53.8%). A higher seroprevalence was demonstrated in patients with CD4+ lymphocyte counts between 100-200 cells/mm³. A statistically significant association between age increase and IgG-CMV antibody titers (p=0.009) was observed.. CMV infection has a high prevalence in human immunodeficiency virus infected patients at Bolivar State (Venezuela), which increases proportionally to age.

Etiología de diarrea aguda en niños menores de 5 años Ciudad Bolívar, Venezuela / Etiology of acute diarrhea in children under five years of age in Ciudad Bolivar, Venezuela

Se determinó la etiología infecciosa de la diarrea aguda en niños menores de 5 años en Ciudad Bolívar, Estado Bolívar. Para ello, se procesaron 110 muestras de heces. Se realizó un examen directo de heces, métodos de concentración Kato-Katz, formol-éter y Kinyoun para identificación de parásitos; detección de antígenos virales de Adenovirus y Rotavirus mediante Látex Diarlex®, coprocultivo y Tricrómica modificada de Ryan-Blue para Microsporidium spp. La prevalencia de parasitosis intestinal fue 27,3%, siendo Blastocystis hominis y Giardia lamblia las más frecuentes (11,8% y 9,2% respectivamente). Once muestras resultaron positivas para Rotavirus (10,0%) y 3 para Adenovirus (2,7%). Las enterobacterias diagnosticadas fueron Escherichia coli enteropatógena (2,7%; 3/110), Salmonella spp (1,8%; 2/110) y Shigella spp (0,9%; 1/110). Los síntomas más frecuentes fueron: fiebre (40,1%) y dolor abdominal (27,3%). No se observó Microsporidium spp. No hubo asociación significativa entre la presencia de enteropatógenos y los síntomas (p>0,05). Se concluye que la etiología de las diarreas agudas en niños menores de 5 años en Ciudad Bolívar, durante el período de estudio, fue principalmente de origen parasitario y viral.

The infectious etiology of acute diarrhea in children under five years of age in Ciudad Bolivar, Bolivar State was determined. One hundred and ten stool samples were processed. The tests included direct examination, the Kato-Katz concentration method, the formol-ether method and the Kinyoun method for parasite identification, detection of viral Adenovirus and Rotavirus antigens through Latex Diarlex ®, stool culture, and modified Ryan-Blue trichromic stain for Microsporidium spp. Prevalence of intestinal parasitosis was 27.3% and Blastocytis hominis and Giardia lamblia were the most frequent parasites (11.8% and 9.2% respectively). Eleven samples were positive for Rotavirus (10.0%) and 3 for Adenovirus (2.7%). The enterobacteria diagnosed were enteropathogenic Escherichia coli (2.7%; 3/110), Salmonella spp (1.8%; 2/110) and Shigella spp (0.9%; 1/110). The most frequent symptoms were: fever (40.1%) and abdominal pain (27.3%). Microsporidium spp was not observed. There was no significant association between presence of enteropathogens and symptoms (p>0.05). It is concluded that the etiology of acute diarrhea in children under five years of age in Ciudad Bolivar during the study period was mainly of parasite and viral origin.

Anticuerpos anti-citomegalovirus en sangre del cordón umbilical de recién nacidos / Anti-cytomegalovirus antibodies in umbilical cord blood of newborns

Resumen Se investigó la presencia de anticuerpos IgG e IgM anti-citomegalovirus (CMV), en el suero de muestras de sangre tomadas del cordón umbilical de recién nacidos, mediante técnica inmunoenzimática de uso comercial, cuantificando la concentración de IgG anti-CMV demostrada, comparando su densidad óptica, con las de muestras testigo positivo de 0, 0,4, 1,0, 4,0 y 10 UI/ml. La demostración de IgM anti-CMV, se hizo luego de determinar la densidad óptica de corte de la prueba, por encima de la cual los valores encontrados indicarían la presencia de IgM anti-CMV en la muestra. En 196 (96,0 %), de 204 muestras analizadas, se demostró IgG anti-CMV, pero, en contraste con lo anterior, todas las muestras fueron negativas para IgM anti-CMV. La presencia de IgG anti-CMV en las muestras, en ausencia de IgM anti-CMV, sugiere que esta inmunoglobulina provino de las madres. De ser esto así, el porcentaje de seropositividad materna para IgG anti-CMV, estaría indicando un elevado índice de endemicidad de la infección en mujeres adultas del área.

Abstract Presence of IgG and IgM anti-cytomegalovirus (CMV) antibodies in the serum of blood samples taken from umbilical cord of newborns was investigated with a commercial immuno-enzymatic technique, quantifying the IgG concentration found by comparing its optical density with that of positive control samples containing 0, 0.4, 1.0, 4.0 and 10 IU/ml. Anti-CMV IgM was demonstrated after determining the cut-off optical density for anti-CMV IgM of the test, over which all values found would indicate anti-CMV IgM presence in the sample. Anti CMV IgG was demonstrated in 196 of 204 (96.0%) of the samples studied but, in contrast, all the samples were negative for anti-CMV IgM. Anti-CMV IgG presence and anti-CMV IgM absence in the samples suggests that this immunoglobulin came from the mothers. If this is so, the percentage of maternal anti- CMV IgG serum positivity would be indicating a high index of endemicity for this infection in adult women of the area.