ABSTRACT
The luteinizing hormone receptor (LHR) is a glycoprotein member of the G protein-coupled receptors superfamily. It participates in corpus luteum formation and ovulation in females and acts in testosterone synthesis and spermatogenesis in males. In this study, we extracted RNA from sheep testicles and synthetized the cDNA to amplify the gene lhr-bed. This gene consists of 762 bp and encodes 273 amino acids of the extracellular domain of LHR. The lhr-bed was cloned into pJET1.2/blunt, then subcloned into pCOLD II, and finally, transformed in E. coli BL21 (DE3) cells. Because the induced rLHR-Bed protein was found in the insoluble fraction, we followed a modified purification protocol involving induction at 25 °C, subjection to denaturing conditions, and on-column refolding to increase solubility. We confirmed rLHR-Bed expression by means of Western blot and mass spectrometry analysis. It is currently known that the structure stem-loop 5'UTR on pCOLD II vector is stable at 15 °C. We predicted and obtained RNAfold stability at 25 °C. We successfully obtained the recombinant LHR extracellular domain, with protein yields of 0.2 mg/L, and purity levels of approximately 90%, by means of a single chromatographic purification step. The method described here may be used to obtain large quantities of rLHR-Bed in the future.
ABSTRACT
Maternal and social behavior in multiparous Pelibuey ewes was assessed under intensive production system. The social behavior was recorded several days before and during birth. Mother-young behavior during the first hour after birth was recorded. A selective maternal test was performed at 2 hours postpartum. Eight hours after birth, a double choice test was done in mothers to asses their ability to discriminate between the own or alien lamb. While a similar double choice test was performed in 12 hours-old lambs. The agitation index when the ewes were tested without companions was lower in parturient ewes than in145 days pregnant ewes and non pregnant ewes [parturient ewes: (-0.59 ± 0.9), 145 days pregnant ewes: (2.6 ± 0.7) and non pregnant ewes (4.2 ± 0.9) P < 0.05]. During the first hour after birth the latency to stand up, to begin to look for the udder and to suck was shorter in male than female lambs, also the male lambs sucked for longer time than females (P < 0.05). During this time mothers emitted more high-pitched bleats than low-pitched bleats (P < 0.05). Besides, the ewes got shorter latencies to lick the area of head and thorax of the lamb than its tail, but they licked more frequently the lamb's tail and thorax (P < 0.03). Two hours postpartum all mothers were selective, they showed clear preference to accept to the udder their own lamb and reject actively the alien ones (P < 0.05). At eight or 12 hours, mothers and lambs spent longer time watching and staying with their own familiar animal than with the alien ones (P < 0.05). It is concluded that Pelibuey ewes show an adequate maternal temperament, and the behavior of the newborn lamb could be affected because of its sex.
Se evaluó el comportamiento materno en ovejas multíparas de raza Pelibuey en estabulación, así como la conducta social, antes y durante el parto. Se evaluó el comportamiento madre-cría durante la primera hora posparto y se realizó una prueba de selectividad a dos horas posparto. A las ocho horas se realizó una prueba de elección entre su cordero y uno ajeno. A las 12 h, a los corderos se les hizo una prueba de elección entre la madre propia y una ajena. El índice de agitación sin compañeras fue menor al parto que en ovejas a 145 días de gestación y en ovejas vacías [al parto: (-0.59 ± 0.9), con 145 días (2.6 ± 0.7) y a vacías (4.2 ± 0.9) P < 0.05]. En la primera hora posparto, los corderos machos se incorporaron, iniciaron la búsqueda de la ubre y se amantaron más rápido y por más tiempo que las hembras (P < 0.05). Las madres emitieron más balidos bajos que altos (P < 0.05); limpiaron más rápido a la cría en la cabeza y el tórax que en la cola (P < 0.05), pero limpiaron más veces la cola que el tórax (P < 0.03). A dos horas posparto, las madres fueron selectivas y rechazaron a la cría ajena (P < 0.05). A las ocho y 12 horas, tanto madres como corderos se miraron y permanecieron más tiempo con su co-familiar que con el ajeno (P < 0.05). Se concluyó que las ovejas de la raza Pelibuey muestran buena aptitud maternal, y que la conducta de la cría varía según su sexo.
ABSTRACT
En los organismos aeróbicos el oxígeno es esencial para la vida, pero puede ser tóxico cuando se presentan situaciones favorables en las que sí hay una producción exagerada de especies de oxígeno reactivas (ROS): anión superóxido (O2-) e hidroxilo (-OH), y por la generación del peróxido de hidrógeno (H2O2) que es una especie reactiva del O2 y puede ser precursora de los radicales libres. Las ROS contribuyen al daño molecular y estructural que se presenta en una serie de padecimientos en donde la capacidad antioxidante del organismo es rebasada y por lo tanto incapaz de inactivar las ROS, dando lugar al proceso llamado estrés oxidante. El daño provocado en la membrana celular es inducido por los radicales libres que llevan a la lipoperoxidación. El proceso de congelación y descongelación del semen reduce el porcentaje de espermatozoides vivos, afectando con la movilidad y la viabilidad, y por lo tanto la fertilidad del gameto, fenómeno atribuido a diversos factores, incluyendo los cambios de temperatura y al efecto de las ROS. Durante el metabolismo las mitocondrias del espermatozoide generan ROS que son inactivadas por los mecanismos antioxidantes. Para contrarrestar los efectos de la ROS generados por mecanismos no fisiológicos o en exceso se ha empleado una variedad de antioxidantes, pretendiendo anular o minimizar sus efectos. El objetivo de esta revisión es identificar las causas que dañan a las células espermáticas en la preservación de semen y los sistemas de defensa antioxidante enzimáticos y no enzimáticos