Interferencias por terapia con anticuerpos monoclonales en electroforesis e inmunofijación de proteínas séricas / Interference in serum protein electrophoresis and immunofixation measurments due to monoclonal antibody treatment

Introducción. La terapia con anticuerpos monoclonales desarrollada en los últimos años se utiliza actualmente en numerosas patologías. Al ser similares estructuralmente a las inmunoglobulinas endógenas podrían detectarse como bandas monoclonales mediante técnicas de electroforesis e inmunofijación en el análisis de proteínas séricas resultando un falso positivo e informarse erróneamente como componente monoclonal. Objetivo. Reproducir in vitro la concentración sérica de rituximab, infliximab y tocilizumab y evaluar la interferencia producida por estos fármacos en la electroforesis e inmunofijación de proteínas en gel de agarosa. Material y métodos. Se parte de un pool de sueros de pacientes sanos a los que se añade la cantidad de fármaco necesaria para obtener concentraciones decrecientes de anticuerpos monoclonales. Se realiza la electroforesis y la inmunofijación a estas muestras con diluciones de fármacos en el equipo IINTERLAB G26 de Biometa. Resultados y conclusiones. En los tres fármacos el proteinograma resulta positivo para las concentraciones de fármaco más elevadas y la señal va disminuyendo hasta desaparecer según disminuye la concentración de fármaco. Así mismo la inmunofijación también resulta positiva observando una banda que corresponde a inmunoglobulina G kappa con la diferencia que rituximab y tocilizumab migran en una zona más próxima al cátodo que infliximab. Rituximab, infliximab y tocilizumab se detectan como bandas monoclonales en la electroforesis de proteínas e inmunofijaciones correspondientes siendo falsos positivos en la detección de componentes monoclonales. Es necesario que se conozcan los patrones del proteinograma y de la inmunofijación de los anticuerpos monoclonales utilizados en cada hospital con la finalidad de evitar informar falsos positivos (AU)

Introduction. Monoclonal antibody therapy is being used nowadays to treat many diseases. Due to the structural similarity to endogenous immunoglobulins, they might be detected while testing for serum proteins using immunifixation and electrophoresis techniques, giving as a result false positives and being reported as monoclonal components mistakenly. Objectives. To reproduce rituximab, infliximab and tocilizumab serum concentrations in vitro and to evaluate the interference of these drugs when performing protein electrophoresis and immunofixation with agarose gel electrophoresis. Methods and materials. The amounts of drug needed in order to achieve decreasing concentrations of monoclonal antibody were added to sera samples taken from healthy individuals. Both serum protein electrophoresis and inmunofixation were performed into those drug dilutions using IINTERLAB G26 as equipment. Results and conclusions. The electrophoresis was positive for high drug concentrations in the three monoclonal antibody groups, being the signals weaker with decreasing concentrations. Same result was obtained with immunofixation, noting a band corresponding to a kappa G immunoglobulin which migrates closer to the cathode for the cases of rituximab and tocilizumab than for infliximab. It has been proved that rituximab, infliximab and tocilizumab are detected by agarose gel electrophoresis and their corresponding immunofixations and may cause false positives while detecting monoclonal components. Professionals should know the electrophoresis and immunofixation patterns of the monoclonal antibody drug used in their workplaces in order to avoid reporting false positives (AU)

Análisis interlaboratorio de parámetros inmunoquímicos, paraproteínas y bandas oligoclonales. Informe técnico del IV Taller de Inmunoquímica de laSociedad Española de Inmunología / Report of the IV workshop on immunochemistry of the Spanish Society of immunology

Objetivo: El IV Taller de Inmunoquímica, auspiciado por la SociedadEspañola de Inmunología, consistió en la realización de una serie de comparaciones interlaboratorio para evaluar la homogeneidad de los métodos analíticos en Inmunoquímica (IQ). El objetivo de los Talleres de IQ esdesarrollar herramientas de control de calidad y guías de trabajo que permitan estandarizar los distintos procedimientos analíticos, empleados enel diagnóstico clínico. Métodos: En el Taller 2005, en 21 laboratorios se valoraron los parámetros IQ: Inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM, total IgE, cadenas ligeras κ y λ,C3, C4, FR, PCR y ASLO en muestras de Controles Comerciales. Tambiénse analizaron las paraproteínas en muestras de suero y orina y por vez primera se incorporó el estudio de bandas oligoclonales en líquido cefalorraquídeo (..) (AU)

Objective: The IV Immunochemistry Workshop supported by the“Sociedad Española de Inmunología” (SEI), consisted in a series of interlaboratory comparative studies to evaluate the homogeneity of the analytic methods in immunochemistry. The objective was to develop qualitycontrol tools to standardise diagnostic analytic procedures. Methods: 21 centres have participated in the Workshop. It comprisedthe quantification of IgG, IgA, IgM, and total IgE κ and λ light chain Immunoglobulin; Complement C3 and C4; Rheumatoid Factor (RF); C-reactiveprotein (CRP), and Antiestreptolysin O (ASL) in commercial control serum samples. Monoclonal immunoglobulins present in serum and urine samples were also characterized. For the first time, the study of LCR oligoclonal bands in the serum and cerebrospinal fluid was incorporated. Thestudy was performed using the routine methods currently used in eachlaboratory. The participant laboratories sent the records of the results to (..) (AU)

Molecular biology advance in the Rh blood group system / 法医学杂志

The Rh blood group system is one of the most complex of the known human blood group polymorphisms, including above 45 blood group antigens. Considerable progress has been made in our understanding of the molecular basis of Rh in the past 10 years. The bases of Rh inheritance, RH gene and its evolution, the structure and function of Rh complex, as well as nonerythroid Rh homolog, have been determined. Further improvements have been made in the technology of Rh genotyping. The review provides an update on the advance of Rh blood group to give information in the practice of forensic science.

Inflammatory mediators in nasal lavage among school-age children from urban and rural areas in São Paulo, Brazil

CONTEXTO: Alguns estudos demonstram que o processo inflamatório nas vias aéreas nasais poderia refletir ou mesmo afetar as vias aéreas inferiores. Decidimos avaliar indiretamente o estado inflamatório das vias aéreas nasais de dois grupos de escolares com diferente sensibilização aos aeroalérgenos mais comuns. OBJETIVO: Comparar a atividade inflamatória nas vias aéreas nasais, através da determinação de mediadores inflamatórios no lavado nasal em duas populações distintas de crianças em idade escolar. TIPO DE ESTUDO: Estudo transversal. LOCAL: O estudo foi realizado em duas escolas públicas de ensino fundamental, uma em zona urbana e outra em zona rural, no Estado de São Paulo. MÉTODOS: Foram constituídos dois grupos de 40 escolares que apresentam diferentes taxas de sensibilização a aeroalérgenos comuns. Amostras do lavado nasal foram colhidas para determinação de proteína catiônica eosinofílica (ECP) e triptase. Testes não-paramétricos foram usados na análise estatística. RESULTADOS: Níveis significativamente maiores de proteína catiônica eosinofílica foram encontrados nos estudantes da área urbana (p < 0,05). Não houve diferença estatística nos níveis de triptase entre os dois grupos. Observou-se ainda que, na área urbana, as crianças sensibilizadas aos aeroalérgenos apresentaram maiores concentrações de proteína catiônica eosinofílica, o que não foi observado nas crianças da zona rural. DISCUSSAO: A ausência de atividade de mastócitos e a degranulação aumentada de eosinófilos revelaram uma inflamação crônica nas vias aéreas das crianças estudadas. A maior atividade de eosinófilos na zona urbana, coincidindo com a maior sensibilização aos aeroalérgenos, sugere que deve haver algum fator a mais na área urbana que modula a resposta das vias aéreas influenciando a ativação das células inflamatórias locais. CONCLUSAO: Nossos achados não mostraram diferenças nos níveis de triptase no lavado nasal entre os dois grupos estudados. Por outro lado, as crianças da area urbana apresentaram maiores concentrações de proteína catiônica eosinofílica do que aquelas da zona rural. Observamos ainda que, na area urbana, as crianças sensibilizadas por aeroalérgenos apresentaram maiores concentrações de proteína catiônica eosinofílica do que aquelas não sensibilizadas, enquanto esta diferença não foi observada nas crianças da area rural.

Dinâmica das proteínas séricas de fêmeas bovinas da raça Holandesa naturalmente infectadas pelo vírus da leucose dos bovinos / Serun protein dynamics in Holstein cows naturally infected with bovine leukemia virus

Com o objetivo de avaliar a dinâmica das proteínas séricas de fêmeas bovinas da raça holandesa, criadas no Estado de Säo Paulo e naturalmente infectadas pelo vírus da leucose dos bovinos, foram colhidas 60 amostras de soro sangüíneo. Os animais foram divididos em 3 grupos experimentais: Grupo 1 - composto de 20 fêmeas näo reagentes ao antígeno gp-51 do vírus da leucose dos bovinos; Grupo 2 - composto de 20 fêmeas reagentes ao antígeno gp-51 do vírus da leucose dos bovinos com linfocitose. A avaliaçäo do proteinograma sérico foi realizada pela determinaçäo dos teores séricos de proteína total pelo método do biureto e a separaçäo das fraçöes albumina, alfaglobulina, betaglobulina e gamaglobulina através de eletroforese. A determinaçäo quantitativa dos níveis séricos de imunoglobulinas IgM e IgG foi realizada através de imunodifusäo radial simples. Os valores séricos do proteinograma e da concentraçäo sérica das imunoglobulinas IgG e IgM dos animais näo reagentes ao vírus da leucose dos bovinos foram semelhantes àqueles observados nos animais reagentes ao vírus da leucose dos Bovinos sem linfocitose e no grupo de animais reagentes ao vírus da leucose dos bovinos com linfocitose.

Involvement of blood serum in amphibian fertilization

A proteolytic enzyme secreted by the first portion of amphibian oviduct, pars recta, called oviductin in Xenopus laevis, causes ultrastructural alterations on the extracellular matrix of coelomic eggs, turning them susceptible to fertilization. Although great advances have been made in the field of reproduction, the molecular mechanisms responsible for the fusion between the egg and the sperm are yet to be understood. We have recently demonstrated the presence of proteins from pars recta fluid in blood serum and extracellular matrix of coelomic eggs in Bufo arenarum. Here we show, using immunofluorescence procedures, that blood serum components are present in the extracellular matrix of coelomic and pars recta fluid-conditioned eggs in Bufo arenarum. Furthermore, by assessing the neutralizing effect on the conditioning activity of pars recta fluid on coelomic eggs we found that antibodies against pars recta secretions and blood serum inhibited the effect of sperm-lysin on the vitelline envelope of conditioned oocytes and impaired fertilization by sperm. Thus, serum proteins appear to be implicated in the molecular events that lead to amphibian fertilization

Involvement of blood serum in amphibian fertilization

A proteolytic enzyme secreted by the first portion of amphibian oviduct, pars recta, called oviductin in Xenopus laevis, causes ultrastructural alterations on the extracellular matrix of coelomic eggs, turning them susceptible to fertilization. Although great advances have been made in the field of reproduction, the molecular mechanisms responsible for the fusion between the egg and the sperm are yet to be understood. We have recently demonstrated the presence of proteins from pars recta fluid in blood serum and extracellular matrix of coelomic eggs in Bufo arenarum. Here we show, using immunofluorescence procedures, that blood serum components are present in the extracellular matrix of coelomic and pars recta fluid-conditioned eggs in Bufo arenarum. Furthermore, by assessing the neutralizing effect on the conditioning activity of pars recta fluid on coelomic eggs we found that antibodies against pars recta secretions and blood serum inhibited the effect of sperm-lysin on the vitelline envelope of conditioned oocytes and impaired fertilization by sperm. Thus, serum proteins appear to be implicated in the molecular events that lead to amphibian fertilization

On the correct determination of reference values for serum antibodies against pigeon serum antigen using a group of healthy blood donors

An ensymatic immunoassay was developed in order to evaluate the statistical distribution of IgG serum antibodies against pooled pigeon ser antigen in 102 healthy blood donors (HBD). A non-normal distribution was obtained as demonstrated by abnormal values of skewness (2.02) and kurtosis (6.50). A cut-off point (0.120) was determined from the mean plus 2 standard derivations of the optical density values obtained in the HBD group. This value was able to segregate 94 percent of subjects. However, when calculation of the mean less 2 SD was performed to delimit 95 percent of the samples, an aberrant negative value was obtained. In contrast, when the nonparametric method of percentile calculation was applied, an optical density value of 0.130 discriminated 97.5 percent of samples. In addition, the interval between p97.5 and p2.5 delimited 95 percent of samples. We conclude that when reference values and cut-off point are determined from an enzymatic immunoassay, careful analysis of the statistical distribution of reference values is necesary in order to avoid the inappropiated in this study for antibodies against pigeon serum antigens

Identificación de una fuente humana de alimentación de mosquitos mediante la técnica de coaglutinación / Identification of a human source for feeding mosquitoes by the coagglutination technique

Se describe la utilización de la técnica de coaglutinación para la identificación de una fuente humana de alimentación de mosquitos. La dilución de las muestras de sangre ingeridas en papel de filtro se hizo en 2 mL de una solución de cloruro de sodio al 0,85 por ciento. Se utilizó una suspensión de estafilococos sensibilizados con un suero normal de conejo como control negativo. La suspensión de Staphylococcus aureus sensibilizados con suero de conejo anti-proteínas plasmáticas humanas y suero de conejo anti-IgG humana discriminó bien entre sangre humana y no humana. No se observó aglutinación con el control negativo. Esta técnica resultó se sensible para identificar el 100 por ciento de las muestras de sangre humana llevadas al papel 24 h después de que los moquitos completaron su alimentación a una temperatura de 26 a 28ºC. En mosquitos alimentados y conectados en el campo, la prueba se comportó de forma satisfactoria, en consecuencia puede ser utilizada en trabajos de rutina en el campo. Los resultados mostraron la sensibilidad y especificidad de este método para la identificación de sangre humana ingerida por mosquitos

Identificación de una fuente humana de alimentación de mosquitos mediante la técnica de coaglutinación / Identification of a human source for feeding mosquitoes by the coagglutination technique

Se describe la utilización de la técnica de coaglutinación para la identificación de una fuente humana de alimentación de mosquitos. La dilución de las muestras de sangre ingeridas en papel de filtro se hizo en 2 mL de una solución de cloruro de sodio al 0,85 por ciento. Se utilizó una suspensión de estafilococos sensibilizados con un suero normal de conejo como control negativo. La suspensión de Staphylococcus aureus sensibilizados con suero de conejo anti-proteínas plasmáticas humanas y suero de conejo anti-IgG humana discriminó bien entre sangre humana y no humana. No se observó aglutinación con el control negativo. Esta técnica resultó se sensible para identificar el 100 por ciento de las muestras de sangre humana llevadas al papel 24 h después de que los moquitos completaron su alimentación a una temperatura de 26 a 28ºC. En mosquitos alimentados y conectados en el campo, la prueba se comportó de forma satisfactoria, en consecuencia puede ser utilizada en trabajos de rutina en el campo. Los resultados mostraron la sensibilidad y especificidad de este método para la identificación de sangre humana ingerida por mosquitos(AU)

Variación de algunas proteínas séricas en niños asmáticos entre 7 y 14 años / Variation of some serum proteins in asthmatic children aged 7 - 14 years

Se señalan los resultados del comportamiento de algunas proteínas séricas en un grupo de 44 pacientes pediátricos asmáticos, estudiados por métodos electroforéticos e inmunoquímicos. Se informa que las investigaciones fueron realizadas al ingreso y al mes del egreso respectivamente. Se observa que las proteínas de mayor poder diagnóstico son: la alfa-1-antitripsina, las zonas alfa 2 de la electroforesis de proteínas (EPF), la haptoglobina, la ceruloplasmina y la proteína C rectiva (AU)

Variación de algunas proteínas séricas en niños asmáticos entre 7 y 14 años / Variation of some serum proteins in asthmatic children aged 7 - 14 years

Se señalan los resultados del comportamiento de algunas proteínas séricas en un grupo de 44 pacientes pediátricos asmáticos, estudiados por métodos electroforéticos e inmunoquímicos. Se informa que las investigaciones fueron realizadas al ingreso y al mes del egreso respectivamente. Se observa que las proteínas de mayor poder diagnóstico son: la alfa-1-antitripsina, las zonas alfa 2 de la electroforesis de proteínas (EPF), la haptoglobina, la ceruloplasmina y la proteína C rectiva