Criopreservación de células estromales derivadas del tejido adiposo: viabilidad utilizando un medio definido libre de proteína animal / Cryopreservation of adipose derived stromal cells: viability using a defined free of animal protein médium

RESUMEN

Introducción y Objetivo. El tejido adiposo es una fuente de células estromales de fácil acceso. Para su almacenamiento y posterior aplicación en clínica es importante que el método de criopreservación a utilizar mantenga adecuadas tasas de viabilidad tras un ciclo de congelación. El objetivo del presente trabajo es obtener células estromales humanas derivadas del tejido adiposo, implementar un protocolo de criopreservación libre de proteína animal y medir las tasas de viabilidad posterior a un ciclo de criopreservación para su eventual aplicación clínica. Material y Método. Utilizamos grasa fresca de 5 pacientes sometidas a lipoaspiración y aislamos las células estromales mediante técnicas de digestión enzimática y expansión celular. Realizamos la caracterización de las células mediante inmunofenotipificación. Criopreservamos las células utilizando dimetil-sulfóxido 10% y las almacenamos durante 1 mes en nitrógeno líquido. Evaluamos la tasa de viabilidad mediante ioduro de propidio y citometría de flujo, antes y después de un ciclo de criopreservación. Resultados. Obtuvimos células estromales derivadas del tejido adiposo, confirmado con el panel de inmunofenotipificación. Las tasas de viabilidad promedio obtenidas con ioduro de propidio fue 61.89% mientras que la tasa de mortalidad fue 32.68% tras un ciclo de criopreservación. Conclusiones. Mediante un protocolo de criopreservación utilizando un medio definido con dimetil-sulfóxido 10% en ausencia de proteína animal, es posible obtener tasas aceptables de viabilidad de las células estromales derivadas del tejido adiposo tras un ciclo de criopreservación (AU)

ABSTRACT

Background and Objective. Adipose tissue is an easy access source of stromal cells. For storage and subsequent clinical application, it is important that the method of cryopreservation used maintain adequate viability rates after a cycle of freezing. Our aim is to get stromal cells derived from human adipose tissue, implement a protocol of cryopreservation free of animal protein and subsequent measure viability rates after a cryopreservation cycle for its posterior clinical use. Methods. Fresh adipose tissue of 5 patients undergoing liposuction was used and stromal cells were isolated by enzymatic digestion techniques and cell expansion. Characterization of the cells was performed by immunophenotyping. Cells using 10% dimethylsulfoxide and stored for 1 month were cryopreserved in liquid nitrogen. Viability rates were assessed by propidium iodide and flow cytometry before and after a cryopreservation cycle. Results. Stromal cells derived from adipose tissue, confirmed immunophenotyping panel, were obtained. The average viability rates obtained with propidium iodide was 61.89% while the mortality rate was 32.68% after a cryopreservation cycle. Conclusions. Using a cryopreservation protocol with a defined medium with 10% dimethylsulfoxide and animal protein free, it is possible to obtain acceptable viability rates of stromal cells derived from adipose tissue after a cryopreservation cycle (AU)