Selección de variantes Bvg- de Bordetella pertussis / Selection of Bordetella pertussis Bvg- variants

RESUMEN

Las cepas virulentas (Bvg+) de Bordetella pertussis expresan numerosos factores de virulencia. Estos factores están regulados por el locus bvg en respuesta a estímulos ambientales, a través del proceso reversible de modulación antigénica. A su vez, mutaciones en el locus bvg originan variantes avirulentas (Bvg-) que no expresan factores de virulencia en ninguna condición de cultivo. En este trabajo hemos seleccionado variantes espontáneas Bvg- de B. pertussis Tohama I y 10536, potencialmente útiles para el estudio de marcadores de virulencia, utilizando como medios selectivos Stainer-Scholte agarizado suplementado con 1 o/o de Casamino-acids (SSA-CAS) y Jones-Kendrick con 0,20 microgramos/ml de eritromicina (JK-Ery). Paralelamente hemos estudiado la eficiencia de recuperación de células de B. pertussis Tohama 1, 10536 y 40103 (cepas Bvg+) y de la cepa Bvg- 347 (control del fenotipo avirulento) en SSA-CAS y en Steiner-Scholte agarizado (SSA), y analizado el fenotipo de las células recuperadas a partir de ellos. Para la caracterización fenotípica se utilizaron los siguientes marcadores de fase virulenta producción de hemólisis, producción de hemaglutininas y perfiles de proteínas de fracciones enriquecidas en membrana externa. Las tres cepas Bvg+ ensayadas mostraron diferente comportamiento en estos medios. B. pertussis Tohama 1 y 10646 no crecieron en SSA, mientras que la eficiencia de recuperación en el medio SSA-CAS fue inferior al 0,001 o/o, obteniéndose variantes Bvg- estables de la cepa Tohama 1, en cambio la cepa 10536 sufrió el fenómeno de modulación, ya que recuperó el fenotipo virulento al ser subcultivada en Bordel-Gengou. El medio JK-Ery permitió seleccionar variantes Bvg- estables de B. pertussis Tohama 1 y 10536. B. pertussis 40103 mostró alta eficiencia de recuperación en SSA y SSA-CAS y retuvo el fenotipo virulento en todos los medios ensayados. Por otra parte, B. pertussis 347, a pesar de ser avirulenta, presento una eficiencia de recuperación pobre en SSA y un crecimiento escaso en JK-Ery, corroborando que no todas las cepas Bv- adquieren la capacidad de crecer en medios que resultan inhibitorios para muchas cepas virulentas