Clonación y expresión de un gen quimérico de la toxina del Bacillus thuringiensis var. berliner por P.C.R. / Cloning and expression of a chimeric toxingene of Bacillus thuringiensis var. berliner by P.C.R.

RESUMEN

El Bacillus thuringiensis (Bt.) vars. berliner y kurstaki, se han usado ampliamente como pesticidas. Estas bacterias producen durante la fase de esporulación una toxina con fuerte actividad lepidoptericida. Los genes que codifican para esas toxinas han sido clonados y expresados recientemente en plantas. Estas plantas transgénicas han mostrado toxicidad por ellas mismas contra los insectos. La metodología conocida como Reacción en Cadena de la Polimerasa (P.C.R.), muy recientemente desarrollada, permite la amplificación de un gen, usando la extensión del ADN por la ADN polimerasa a partir de iniciadores específicos. Un gen truncado conteniendo las 2/3 partes del terminal NH2 del gen original, fue aislado de una preparación de ADN total de esta bacteria usando P.C.R. Este gen quimérico fue acoplado directamente a un promotor inducible de E. coli. El producto del gen sintetizado en E. coli fue identificado por anticuerpos antitoxina y su actividad biológica fue testada usando larvas de Heliothis virescens. El análisis de la secuencia parcial del ADN muestra una alta homología con la secuencia reportada en la región 5', pero tiene una divergencia muy alta en la 3'.