Detection of cytomegalovirus in plasma of patient's HIV by duplex real time PCR / Detección de citomegalovirus en plasma de pacientes con VIH mediante PCR dúplex en tiempo real

RESUMEN

INTRODUCCIÓN: El citomegalovirus (CMV) es capaz de provocar enfermedades graves e incluso mortales en pacientes inmunocomprometidos. Es importante contar con pruebas moleculares de detección viral, sensibles y específicas, utilizando como blanco los genes clave para la replicación viral. En la detección molecular de CMV se han utilizado los genes UL122 (replicación) y UL83 (proteína más abundante del tegumento). OBJETIVO: Detectar y cuantificar el CMV mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) dúplex en tiempo real, a partir de una mínima cantidad de plasma. MATERIAL Y MÉTODOS: Los genes UL122 y UL83 se amplificaron con diferentes fluoróforos mediante PCR dúplex en tiempo real. Para cuantificar el CMV se generó una recta estándar, a partir de DNA del CMV (1.0-0.0000001 ng). RESULTADOS: El rango dinámico de la «recta maestra¼ tuvo una pendiente (m) de -3.0; la eficiencia de amplificación fue del 115.44%; de los plasmas de pacientes con infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) con una carga viral ≥ 100,000 copias/ml, el 11.36% fueron verdaderos positivos para CMV y el 88.64% no tuvieron amplificaciones o estuvieron fuera del rango lineal de detección molecular. CONCLUSIONES: Esta prueba identificó dos genes importantes del CMV (UL122 y UL83) en una sola reacción (FAM:VIC), y se ratificó la detección viral a partir de una mínima cantidad de plasma. Esto se traduce en una menor cantidad de muestra biológica requerida y sumaría una herramienta al área clínica, así como un menor consumo de reactivos y materiales.