Supervivencia in vitro de neuronas dopaminérgicas hibernadas durante siete días / Survival of dopaminergic neurons that were hibernated in vitro for seven days

RESUMEN

Introducción. El uso de tejido fetal fresco en el neurotrasplante presenta considerables dificultades logísticas que limitan su aplicabilidad clínica. Este aspecto podría solucionarse con el desarrollo de procedimientos óptimos de almacenamiento del tejido que no afecten a la viabilidad y la supervivencia dopaminérgica in vivo. Objetivo. Determinar si la hibernación durante siete días influye sobre la supervivencia del tejido mesencefálico in vitro, y comparar el tejido hibernado con el fresco. Material y métodos. El mesencéfalo de rata se hibernó 1, 3, 5 y 7 días a 4 °C. Se preparó la suspensión celular para cultivar durante siete días. Se determinó el número de células TH+ presentes en los cultivos frescos e hibernados. Resultados. La morfología de las neuronas dopaminérgicas hibernadas y cultivadas fue muy similar a la de las células frescas. La comparación de la viabilidad de las células hibernadas con la de las frescas mostró diferencias no significativas. No hay diferencias significativas entre el número de neuronas TH+ observadas en todos los tiempos de hibernación. La supervivencia de células TH+ más baja se alcanzó a los siete días de hibernación. Existen diferencias significativas (p < 0,05) entre el número de neuronas TH+ del tejido fresco y el hibernado. Conclusiones. La hibernación a 4 °C hasta cinco días garantiza la supervivencia in vitro de las células TH+; tiempos mayores, la afecta. Este procedimiento podría considerarse útil para la conservación del tejido humano aplicable en el trasplante clínico. Estos resultados se refieren a condiciones in vitro; por tanto, se requiere estudiar la sobrevivencia y funcionalidad de las neuronas hibernadas y trasplantadas en modelos animales para evaluar su aplicación en la terapia neurorrestaurativa

ABSTRACT

Introduction. The use of fresh foetal tissue in neurotransplants entails considerable problems of logistics that limit its clinical applicability, something that can be resolved by the development of optimal tissue storage procedures that do not affect in vivo viability and survival of dopamine. Aims. To determine whether 7 days’ hibernation affects the survival of mesencephalic tissue in vitro, and to compare it to fresh tissue. Materials and methods. The midbrains of rats were hibernated for 1, 3, 5 and 7 days at 4 °C. A cellular suspension was prepared for culture throughout a 7-day period. The number of TH+ cells present in the fresh and hibernated cultures was determined. Results. The morphology of the hibernated and cultured dopaminergic neurons was very similar to that of the fresh cells. Comparing the viability of the hibernated and fresh cells did not reveal any significant differences. No significant differences between the numbers of TH+ neurons were observed at any of the hibernation times. The lowest rate of TH+ cell survival was reached at seven days’ hibernation. Significant differences (p < 0.05) were found between the number of TH+ neurons for fresh and hibernated tissue. Conclusions. Hibernation at 4 °C for up to five days guarantees the survival of TH+ cells in vitro, but it is affected by longer times. This procedure could be considered useful for preserving human tissue in clinical transplant applications. These results refer to in vitro conditions; therefore, studies must be conducted to investigate the survival and functionality of hibernated and transplanted neurons in animal models to enable us to evaluate its applicability in neurorestorative therapy