Introduction:
The aim of this study was to compare the effect of five types of PEGlated nanoliposomes (PNLs) on α-
synuclein (α-syn) fibrillization, attenuation of microglial activation, and silence of the SNCA
gene, which encodes α-syn.
Methods:
To evaluate the inhibition of α-syn fibrillization, we used standard
in vitro assay based on Thioflavin T (ThT)
fluorescence. Next, to evaluate the attenuation of microglial activation, the concentration of TNF-a and
IL-6 was quantified by
ELISA assay in BV2
microglia cells treated with 100 nM A53T α-syn and PNLs. In order to determine the silencing of the SNCA,
real-time PCR and
Western blot analysis was used. Finally, the
efficacy of PNLs was confirmed in a
transgenic mouse model expressing
human α-syn.
Results:
ThT assay showed both PNL1 and PNL2 significantly inhibited a-syn fibrillization.
ELISA test also showed the
production of TNF-a and
IL-6 was significantly attenuated when
microglial cells treated with PNL1 or PNL2. We also found that SNCA
gene, at both
mRNA and
protein levels, was significantly silenced when BV2
microglia cells were treated with PNL1 or PNL2. Importantly, the
efficacy of PNL1 and PNL2 was finally confirmed in vivo in a
transgenic mouse model.
Conclusions:
In conclusion, the novel multifunctional nanoliposomes tested in our study inhibit α-syn fibrillization, attenuate microglial activation, and silence SNCA
gene. Our findings suggest the
therapeutic potential of PNL1 and PNL2 for treating
synucleinopathies.(AU)
Introducción:
El objetivo de este estudio fue comparar el efecto de cinco tipos de nanoliposomas PEGlados (PNL) sobre la fibrilización de la α-sinucleína (α-syn), la atenuación de la activación microglial y el silencio del gen synuclein alpha (SNCA), que codifica α-syn.
Métodos:
Para evaluar la inhibición de la fibrilización α-syn, utilizamos un ensayo
in vitro estándar basado en la
fluorescencia de la tioflavina T (ThT). A continuación, para evaluar la atenuación de la activación microglial, se cuantificó la concentración de factor de
necrosis tumoral alpha (TNF-a) e interleucina 6 (
IL-6)mediante ensayo
ELISA en
células de
microglía BV2 tratadas con 100 nM de α-syn de A53T y PNL. Para determinar el silenciamiento del SNCA, se utilizó
reacción en cadena de la polimerasa (
PCR) en
tiempo real y
análisis de
Western blot. Finalmente, la
eficacia de las PNL se confirmó en un modelo de
ratón transgénico que expresa α-syn humana.
Resultados:
El ensayo ThT mostró que tanto PNL1 como PNL2 inhibieron significativamente la fibrilización de α-syn. La prueba enzyme-linked immunosorbent assay (
ELISA) también mostró que la producción de TNF-a e
IL-6 se atenuó significativamente cuando las
células microgliales se trataron con PNL1 o PNL2. También encontramos que el gen SNCA, tanto a nivel de
ARN mensajero (
ARNm) como de
proteína, se silenciaba significativamente cuando las
células de
microglía BV2 se trataban con PNL1 o PNL2. Es importante destacar que la
eficacia de PNL1 y PNL2 finalmente se confirmó in vivo en un modelo de
ratón transgénico.
Conclusiones:
Los nuevos nanoliposomas multifuncionales probados en nuestro estudio inhiben la fibrilización α-syn, atenúan la activación microglial y silencian el gen SNCA. Nuestros hallazgos sugieren el potencial terapéutico de PNL1 y PNL2 para el
tratamiento de
sinucleinopatías.(AU)