Desenvolvimento de método para extração de acidos nucleicos de micobacterias e utilização da técnica de PCR (polymerase Chain Reaction) para o diagnostico de hanseniase / ?

RESUMO

Desenvolvemos durante este trabalho um eficiente protocolo para a extração de acidos nucleicos de micobacterias. A alta qualidade do DNA extraido por este procedimento foi mostrada através de eletroforese em gel de agarose, espectrofotometria, construção de bibliotecas genômicas de Mycobacterium leprae, M. tuberculosis e M. bovis-BCG, bem como através de sua utilização como alvo para a amplificação com "Polimerase chain reaction" (PCR). Utilizando oligonucleotideos para uma sequencia repetitiva, específica de M. leprae localizada na região 3', não-codificante do antígeno de 65 kDa, obtivemos uma amplificação altamente sensível e especifica, tanto com DNA de M. leprae purificado quanto com DNA obtido de amostras clinicas de pacientes com hanseniase, otimizando para isto, protocolos para o processamento das diferentes amostras clínicas. Um total de 27 pacientes com espectro clinico e indice baciloscopico definido foram rastreados por PCR para a presença ou ausencia de M. leprae utilizando como amostras clinicas, biopsias, linfa e células mononucleares isoladas do sangue oeriferico. Os resultados foram analisados por visualização em gel de eletroforese e por hibridização com oligonucleotideos ou com um fragmento clonado da sequencia repetitiva. 25 pacientes foram positivos para a infecção com M. leprae em pelo menos um dos testes e umja avaliação preliminar do uso de PCR foi realizada.