Avaliação da imunogenicidade de uma porção conservada da proteína LigA de Leptospira interrogans em camundongo

RESUMO

Espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira são o agente causador da leptospirose, uma doença zoonótica amplamente disseminada que afeta humanos e animais. Leptospiras patogênicas colonizam os túbulos renais de uma ampla variedade de animais selvagens e domésticos, os quais excretam as bactérias vivas, via urina, no ambiente. O homem é o hospedeiro acidental e terminal da doença, e após a infecção pode apresentar um quadro variado de manifestações clínicas. Atualmente, estima-se que anualmente cerca de 1 milhão de pessoas são acometidas pela leptospirose em todo o mundo, o que resulta em aproximadamente 60 mil mortes. O entendimento da interação patógeno-hospedeiro, bem como da resposta imune contra proteínas de Leptospira spp., é um passo fundamental para o desenvolvimento de vacinas contra a leptospirose. As proteínas presentes na membrana externa das leptospiras são alvos interessantes de estudo, pois devido a sua localização podem interagir diretamente com o hospedeiro. Resultados prévios indicam que as proteínas Leptospiral Immunoglobulin-like A e B (LigA e LigB) são candidatos vacinais interessantes; ambas proteínas apresentam uma região N-terminal bastante conservada, o que pode ser aproveitada para a geração de anticorpos que possam reconhecer concomitantemente LigA e LigB. Assim, o presente estudo tem como objetivo clonar, expressar e purificar uma sequência que corresponde a porção conservada das proteínas LigA/LigB de L. interrogans sorovar Copenhageni e avaliar suas propriedades imunogênicas. A porção conservada do gene LIC10465 (ligA) foi amplificada por PCR, clonada no vetor pAE e a proteína recombinante expressa em diferentes linhagens de E. coli. A purificação da proteína recombinante foi realizada por cromatografia de afinidade ao níquel. A proteína recombinante produzida foi detectada por Western Blotting e ELISA a partir de incubação com anticorpos monloclonais anti-his, soro hiperimune produzido em animais BALB/c e soros positivos para a leptospirose. A obtenção e validação imunológica dessa proteína, na sua forma recombinante contribuirá significativamente para o avanço dos estudos relacionados à patogenicidade das leptospiras.