Validation of high-performance liquid chromatography methods for determination of zidovudine, stavudine, lamivudine and indinavir in human plasma

RESUMEN

Objetivo: Fueron descritos y validados m¨¦todos anal¨ªticos simplespara la determinaci¨®n de zidovudina (AZT), estavudina (d4T),lamivudina (3TC), e indinavir (INV) en plasma humano por cromatograf¨ªal¨ªquida de alta resoluci¨®n (HPLC) con detecci¨®n UV.M¨¦todo Se aplic¨® la extracci¨®n en fase s¨®lida para la preparaci¨®nde las muestras previo al an¨¢lisis. La corrida cromatogr¨¢ficase realiz¨® en una columna anal¨ªtica C-18 y el tiempo de retenci¨®nse movi¨® en un rango de 6,8-11,9 min para d4T, 7,5-9,0para 3TC y 11,2-11,9 para AZT e INV. Se validaron 4 m¨¦todosen cuanto a especificidad, precisi¨®n y exactitud entre d¨ªas y en eld¨ªa, as¨ª como recobrado y estabilidad.Resultados: Los rangos de concentraciones de las curvasanal¨ªticas eran de 10-1600 ng/ml para d4T, 50-3200 ng/ml para3TC, 0,05-5,0 ¦Ìg/ml para AZT y 0,1-10,0 ¦Ìg/ml para INV. Sedemostr¨® la estabilidad del analito durante el procesamiento de lasmuestras y el almacenamiento. Para las 4 formulaciones los resultadosdel por ciento de recobrado fue superior al 89%.Conclusiones: Estos m¨¦todos demostraron ser simples, exactos,precisos y son los utilizados actualmente en nuestro laboratoriopara el an¨¢lisis cuantitativo de productos antirretrovirales enplasma, as¨ª como para posteriores estudios de farmacocin¨¦tica ybioequivalencia(AU)

ABSTRACT

Objective: Simple methods for the determination of zidovudine(AZT), stavudine (d4T), lamivudine (3TC) and indinavir (INV)in human plasma by reversed-phase liquid chromatography(HPLC) with UV detection were described and validated.Method: Solid-liquid extraction procedures were applied tothe samples prior to analysis. Chromatography was performed ona C-18 analytical columns and the retention time ranged from 6.8to 8.0 min for stavudine, 7.5 to 9.0 min for lamivudine, 11.2 to11.9 min for zidovudine and indinavir. Four methods were validatedfor specificity, inter-and intra-assay precision and accuracy,absolute recovery and stability.Results: Analytical curve ranged from 10-1600 ng/ml forstavudine, 50-3200 ng/ml for lamivudine, 0.05-5.0 ¦Ìg/ml forzidovudine and 0.1-10.0 ¦Ìg/ml for indinavir. Analytes stabilityduring sampling processing and storage were established. Extractionrecoveries are higher than 89% for all formulations.Conclusions: These methods proved to be simples, accurateand precise, and are currently in use in our laboratory for thequantitative analysis of antiretrovirals products in plasma, and forfurther pharmacokinetics and bioequivalence studies(AU)