Expresión de moléculas B7 y TLR:9 en células epiteliales corneales infectadas con adenovirus: implicaciones clínico-patológicas en la queratoconjuntivitis viral / Expression of B7 molecules and TLR-9 on corneal epithelial cells infected with adenovirus: clinico-pathological implications in viral keratoconjunctivitis

RESUMEN

Objetivo: Las moléculas B7 son una familia deproteínas que coestimulan al linfocito T durante laactivación inmunitaria, normalmente las célulasepiteliales corneales (CEC) no expresan estas moléculasen superficie. Los receptores tipo Toll jueganun papel importante en la respuesta inmune innatahacia patógenos invasores y recientemente sedemostró su expresión en córneas de ratón. El objetivodel presente estudio fue determinar si la infecciónviral induce moléculas B7 y TLR9 en CEChumanas.Métodos: Las CEC fueron obtenidas de corneashumanas tratadas con dispasa II y crecidas en presenciade medio hormonal epitelial suplementadohasta su confluencia. Posteriormente las células fueron infectadas con adenovirus 5 (Ad5) y cultivadasa diferentes tiempos. Las CEC fueron recuperadasy marcadas contra CD80, CD86, TLR-9 y citoqueratina.Todas las células fueron analizadas porcitometría de flujo.Resultados: La infección de CEC con Ad5 indujola expresión de moléculas B7 y TLR-9 desde las 24h, alcanzando su máximo nivel a las 72 h. La expresiónde moléculas B7 a las 72 h fue como sigue,expresión de CD80 en CEC infectadas 62% errorestándar (ES) 2.6 versus 3 ES 1.2 (p < 0,001) enCEC no infectadas; expresión de CD86 en CECinfectadas 95% ES 2.1 versus 5% ES 1.2 (p <0,001) en CEC no infectadas. La expresión de TLR-9 a las 72 h fue de 80% ES 1.2 en CEC infectadasversus 5% ES 1 en CEC no infectadas (p < 0,001).Conclusiones: La infección por Ad5 induce laexpresión de moléculas B7 y TLR-9 en CEC

ABSTRACT

Purpose: B7 molecules are a family of proteins that co-stimulate T cells during immune activation. Normally the corneal epithelial cells (CEC) do not express these molecules on their cell surface. Tolllike receptors play an important role in the innate immune response to invading pathogens and recently have been demonstrated to be expressed on mice cornea. The objective of this study was to determine whether adenoviral infection induces B7 molecules and TLR9 on human CEC. Methods: CEC were isolated from human corneas treated with dispase-II, and grown in the presence of supplemented hormonal epithelial medium until confluence. Then CEC were then infected with adenovirus 5 (Ad5) and cultured for different times. The CEC were then recovered and stained against human CD80, CD86, TLR-9 and cytokeratin. All cells were analyzed by flow cytometry. Results: Ad5 infection of CEC induced the expression of B7 molecules and TLR-9 after 24 hours in culture, rising to maximum levels at 72 hours. B7 expression at 72 hours was as follows: CD80 expression on infected CEC was 62% (standard error [SE] 2.6) versus 3% (SE 1.2) on non-infected CEC (p<0.001); CD86 expression on infected CEC was 95% (SE 2.1) versus 5% (SE 1.2) on non-infected CEC (p<0.001). TLR-9 expression at 72 hours was 80% (SE 1.2) on infected CEC versus 5% (SE 1) on non-infected CEC (p<0.001). Conclusions: Ad5 infection induced the expression of B7 molecules and TLR-9 on CEC