Selección de genes de referencia en semen equino criopreservado para su uso en estudios de expresión genética con la técnica de PCR cuantitativa / Reference genes selection in cryopreserved equine semen for its use in studies of gene expression with the quantitative PCR technique
Sanid. mil
; 70(1): 20-24, ene.-mar. 2014. tab, graf
Artículo
en Español
| IBECS
| ID: ibc-122900
Biblioteca responsable:
ES1.1
Ubicación: BNCS
RESUMEN
INTRODUCCIÓN:
La gestión de bancos de germoplasma implica la conservación y uso de dosis seminales, pero también pueden ser una fuente de estudio sobre la calidad de los sementales y las propiedades del semen para su empleo post descongelación. Un criterio para medir la calidad seminal puede basarse en las diferencias de expresión de algunos genes implicados en la espermatogénesis y la maduración espermática.OBJETIVO:
Análisis de genes expresados en semen equino criopreservado que ofrezcan una adecuada amplificación, especificidad y estabilidad para su empleo como genes de referencia en futuros estudios de expresión genética. MATERIAL YMÉTODOS:
Purificación de espermatozoides vivos mediante un gradiente de concentración discontinua a partir de pajuelas de semen criopreservado correspondiente a cuatro sementales. Extracción orgánica de ácidos ribonucleicos con tratamiento con la enzima desoxiribonucleasa y la amplificación selectiva de siete genes candidatos mediante retrotranscripción y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real en un solo paso.RESULTADOS:
Tres de los genes seleccionados, β-Actina, Ubiquitina B y proteína Ribosomal L32 se amplifican correctamente. β-Actina, Ubiquitina B manifiestan la mayor estabilidad.CONCLUSIÓN:
En los espermatozoides procedentes de muestras de semen criopreservado equino se puede detectar la presencia de ARNm, siendo el gen de la β-Actina y de la Ubiquitina B los más indicados como genes de referencia de los siete candidatos analizadosABSTRACT
INTRODUCTION:
The germoplasm bank management involves the conservation and use of semen doses, but can also be a source of study on the quality of stallions and semen properties for use after thawing. A criterion for measuring the semen quality may be based on differences in expression of some genes involved in spermatogenesis and sperm maturation.OBJECTIVE:
Analysis of genes expressed in equine cryopreserved sperm that can provide adequate amplification, specificity and stability for use as future reference genes in gene expression studies. MATERIAL ANDMETHODS:
Purification of live sperm through a discontinuous concentration gradient from cryopreserved semen straws corresponding to four stallions. Organic extraction of ribonucleic acids with deoxyribonuclease treatment and the selective amplification of seven candidate genes using a retrotranscription and a real time chain reaction of the polymerase in one step mode. Specificity is tested by melting curves and agarose gel electrophoresis. Also the stability of the genes is calculated.RESULTS:
Three of the selected genes, β-actin, Ubiquitin B and Ribosomal protein L32 were properly amplified. β-Actin and Ubiquitin B showed the best stability.CONCLUSION:
mRNA was amplified from equine cryopreserved semen samples, being the β-Actin and the Ubiquitin B genes the most suitable reference genes of the seven candidates analyzed
Texto completo:
Disponible
Colección:
Bases de datos nacionales
/
España
Base de datos:
IBECS
Asunto principal:
Criopreservación
/
Expresión Génica
/
Análisis de Semen
/
Caballos
Límite:
Animales
Idioma:
Español
Revista:
Sanid. mil
Año:
2014
Tipo del documento:
Artículo
Institución/País de afiliación:
Centro Militar de Cria Caballar de las Fuerzas Armadas/España
/
Centro Militar de Cría Caballar de Ávila/España
/
Universidad de Córdoba/España