Isolamento e caracterizaçäo dos genes codificadores da glicoproteína de superfície de 90kDa(GP90) e das proteínas ricas em serina, alanina e prolina (SAP) de Trypanosoma cruzi / Isolation and caracterization of the genes that encode a surface glycoprotein of 90 kDa(GP90) and serine-, alanine-, and proline-rich proteins(SAP) of T. cruzi

RESUMO

Os tripomastigotas metacíclicos do Trypanosoma cruzi expressam na sua superfície uma proteína majoritária de 90 kDa (GP90). Anteriormente, nós tínhamos relatado o isolamento de um clone de cDNA (T7, GenBank L11287) que codifica a regiao carboxi-terminal da GP90. Com o objetivo de isolar cópias completas da regiao transcrita do gene GP90, nós clonamos cDNAs por RT-PCR e triagem imunológica de bibliotecas de expressao de cDNA. O clone cDNA-L1, o protótipo do gene GP90, apresenta uma fase de leitura aberta (ORF) que codifica um polipeptídeo de 694 aminoácidos com uma Mr aparente de 75.839,97 daltons. Ele paresenta dois motivos Asp (SxDxGxTW), assim como o motivo VTVxNVFLYDR, ambos comuns a todos membros da superfamília GP85/sialidase de T. cruzi. A ORF do cDNA-LI contém dois possíveis codons de iniciaçao e um sítio de "splice" antes do segundo ATG, sugerindo a existência de desplicing" alternativo nos transcritos do gene GP90. O cDNA J20b, isolado por triagem imunológica de uma biblioteca de expressao, codifica o domínio C-terminal da GP90 com uma seqüência típica de inserçao de âncora GPI. Análise dos clones de cDNA GP90 revelou a existência de vários sítios de modificaçoes pós-traducionais, tais como N-glicosilaçao e adiçao de âncora GPI. Estruturalmente, as GP90s sao glicoproteínas de superfície contendo cadeias de oligossacarídeos N-ligados e podem ser ancoradas à membrana por uma seqüência GPI. Comparaçao das seqüências do gene GP90 com membros do grupo II (GP85, TC85, SA85, ASP-2) da superfamília das GP85/sialidase revelou 52-62 por cento de identidade ao nível de aminoácidos, com regioes bastante conservadas separadas por seqüências divergentes de aminoácidos. Baseando-se nas suas propriedades estruturais os genes iiP90 poderiam ser considerados como membros do grupo II da superfamília das GP85/sialidases. Análise de "Northern blot" mostrou que os genes GP90 sao preferencialmente acumulados nos tripomastigotas metacíclicos. Estudos adicionais sobre a transcriçao destes genes utilizando-se RT-PCR mostrou a presença de transcritos GP90 em...(au)