Efeitos de diferentes sistemas de cultivo in vitro sobre o crescimento de folículos pré-antrais isolados de ovários de fetos bovinos / Effects of different systems of in vitro culture on the isolated preantral follicles from fetal bovine ovaries

RESUMO

O objetivo deste estudo foi aplicar diferentes sistemas de cultivo in vitro para folículos pré-antrais de fetos bovinos da raça Nelore no último trimestre de gestação e para identificar o sistema mais eficiente durante o crescimento dos folículos isolados. Para isso, folículos pré antrais foram isolados mecanicamente e submetidos ao cultivo individual, por 9 dias, em meio não suplementado ou suplementado com soro fetal bovino (SFB), albumina sérica bovina (BSA) ou suplemento definido sintético substituto do soro KnockoutSR(KNO). Avaliou-se ainda, o efeito do gel de colágeno ou monocamada de fibroblastos fetais bovinos como substrato para o cultivo in vitro. A avaliação do aumento de diâmetro folicular foi realizada no dia da colheita (0 hora) e a cada 72 horas de cultivo. A associação entre meio suplementado com SFB e uso de gel de colágeno como substrato foram significativamente mais efetivos sobre o aumento do diâmetro folicular quando comparados aos demais tratamentos. Quando fragmentos de tecido ovariano foram submetidos ao cultivo in vitro, não houve preservação da ultraestrutura folicular por mais de 3 dias de cultivo, em qualquer dos tratamentos utilizados. Ainda não está estabelecido um sistema de cultivo adequado que sustente a diferenciação e multiplicação das células da granulosa e que mantenha o contato das mesmas com o oócito para prover moléculas e fatores que supram a demanda metabólica. Entendemos que esta pesquisa apresentou avanços promissores na busca pelo estabelecimento um sistema de cultivo in vitro de folículos pré-antrais em bovinos.

ABSTRACT

The objective of this study is to use different in vitro culture systems of preantral follicles from Nelore breed bovine fetuses in the last gestation quarter. The evaluation of treatments considered the time of growth of isolated follicles. Preantral follicles were mechanically isolated and submitted to the individual culture, for 9 days, in mediano supplemented or supplemented with fetal calf serum (FCS), bovine serum albumin (BSA) or synthetic defined supplement substitute of serum KnockoutSR (KNO). We have also evaluated the effects of collagen gel or fetal calf fibroblast monolayer as substratum for in vitro cultures. The increase on the follicular diameter was followed in the first day (0 h), at the 72 h, 144 h and 216 h. Considering cultures of isolated follicles, the results have shown that the association between media supplemented with FCS and collagengel was significantly more efficient on the increase of the follicular diameter than other treatments. It is not still established a system ofappropriate cultivation that sustains the differentiation and multiplication of the granular cells and that maintains the contact of the same ones with the oocyte to provide molecules and factors that supply the metabolic demand. We also under stand that our results also represent another promising step on the search for the ultimate system of in vitro culture of preantral follicles from bovines.