Insemination of bocachico fish (Prochilodus magdalenae) with fresh or cryopreserved semen: effect of spermatozoa/oocyte ratio / Inseminacion de bocachico (Prochilodus magdalenae) con semen fresco o crioconservado: efecto de la proporción espermatozoide/oocito / Inseminação do bocachico (Prochilodus magdalenae) usando sêmen fresco o criopreservado: efeito da razão espermatozoide/oócito

ABSTRACT

Background: cryopreservation is an important biotechnological tool in the conservation of biodiversity, particularly for endangered species. Objective: to evaluate six different spermatozoa/oocyte ratios using fresh and cryopreserved semen in bocachico fish (Prochilodus magdalenae). Methods: fresh semen was collected and its quality determined to verify cryopreservation feasibility. The semen was put in 5 mL straws and mixed with a solution (5.5% glucose, 12% egg yolk, and 10% dimethyl sulfoxide -DMSO-) in a 14 dilution (semensolution). The semen was frozen in nitrogen vapor dry shipper for 30 min, rapidly transferred to storage thermos, and submerged directly into liquid nitrogen (LN; -196 °C). Straws were thawed at 60 ºC for 45 seconds. Motility, velocity, and sperm progressivity of fresh and cryopreserved semen were assessed using Sperm Class Analyzer (SCA®) software. Each proportion of spermatozoa/oocyte was assessed with 2 g of eggs (1,630 ± 87 eggs/g) to evaluate fertility (F), hatching (H), and larval survival (LS) rates. Results: the best reproductive performance for fresh semen was obtained inseminating with 160,000 spermatozoa/oocyte (F = 75.0%, H = 67.7%, LS = 32.7%). Similarly, the best reproductive performance for cryopreserved semen was achieved with 320,000 spermatozoa/oocyte (F = 70.0%, H = 48.6%, LS = 19.5%). Conclusion: it is possible to achieve adequate reproductive performance in bocachico fish using cryopreserved sperm (10% DMSO, 5.5% glucose, and 12% egg yolk) at twice the spermatozoa/oocyte ratio used with fresh semen.

RESUMEN

Antecedentes la crioconservación es una herramienta biotecnológica importante para la conservación de la biodiversidad, particularmente de especies en peligro. Objetivo: evaluar seis proporciones diferentes entre espermatozoides/ovocito en la fertilización de bocachico (Prochilodus magdalenae), usando semen fresco o crioconservado. Métodos: se colectó semen y se determinó su calidad para verificar su viabilidad de crioconservación. El semen fue colocado en pajillas de 5 mL y mezclado con una solución crioconservante (5,5% glucosa, 12% yema de huevo y 10% dimethyl sulfoxido -DMSO-) en una dilución 14 (semensolución). El semen fue congelado en un termo de vapores de nitrógeno por 30 min y rápidamente se transfirió a termos de almacenamiento sumergiéndolo directamente en nitrógeno líquido (LN; -196 °C). Las pajillas fueron descongeladas a 60 ºC por 45 segundos. La motilidad, velocidad y progresividad de los espermatozoides, tanto de semen fresco como del congelado, fueron evaluadas usando el software Sperm Class Analyzer (SCA®). Cada proporción de espermatozoides/ovocito fue evaluada en 2 g de huevos (1.630 ± 87 huevos/g) para evaluar fertilidad (F), eclosión (H) y sobrevivencia larval (LS). Resultados: el mejor desempeño reproductivo con semen fresco fue obtenido inseminando con la proporción de 160.000 espermatozoides/ovocito (F = 75,0%, H = 67,7%, LS = 32,7%). De manera similar, el mejor desempeño reproductivo con semen crioconservado fue logrado con la proporción de 320.000 espermatozoide/ovocito (F = 70,0%, H = 48,6%, LS = 19,5%). Conclusión: es posible lograr un adecuado desempeño reproductivo en bocachico usando semen crioconservado (10% DMSO, 5,5% glucosa y 12% yema de huevo) cuando la relación espermatozoide/ovocito usada es del doble de la proporción aplicada para semen fresco.

RESUMO

Antecedentes a criopreservação é uma ferramenta biotecnológica importante na conservação da biodiversidade, particularmente de espécies ameaçadas. Objetivo: foram avaliadas seis proporções de espermatozoides/ovócito na fertilização usando sêmen fresco e crioconservado em fertilização de bocachico (Prochilodus magdalenae), Métodos: o sêmen fresco foi coletado e determinada sua qualidade para verificar a viabilidade de crioconservação. O sêmen foi colocado em palhetas de 5 mL e misturado com a solução crioconservante (5,5% glicose, 12% gema de ovo e 10% dimetilsulfóxido -DMSO-) em numa diluição 14 (sêmensolução). O sêmen foi congelado em botijão de vapores de nitrogênio por 30 min e rapidamente transferido a botijão de armazenagem submergindo-os diretamente em nitrogênio líquido (LN; -196 °C). As palhetas foram descongeladas a 60 ºC por 45 segundos. A motilidade, velocidade e progressividade dos espermatozoides, tanto de sêmen fresco quanto de congelado, foram avaliadas usando o software Sperm Class Analyzer (SCA®). Para avaliar fertilidade (F), eclosão (H) e sobrevivência larval (LS), cada relação de espermatozóide/oócito foi avaliada em 2 g de oócitos (1.630 ± 87 ovos/g). Resultados: o melhor desempenho reprodutivo com sêmen fresco foi obtido inseminando com proporção 160.000 espermatozoides/oócito (F = 75,0%, H = 67,7%, LS = 32,7%). O melhor desempenho reprodutivo com sêmen crioconservado foi verificado na proporção de 320.000 espermatozoides/oócito (F = 70,0%, H = 48,6%, LS = 19,5%). Conclusão: é possível alcançar um adequado desempenho reprodutivo em bocachico usando sêmen crioconservado (10% DMSO, 5,5% glicose e 12% gema de ovo) quando a proporção espermatozoide/oócito usada é o dobro da utilizada para sêmen fresco.