Targeted killing effect of bispecific CAR-T cells on EGFRvⅢ+/CD133+ glioma stem cells / 中国肿瘤生物治疗杂志
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
; (6): 296-301, 2023.
Article
en Zh
| WPRIM
| ID: wpr-972717
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WPRO
ABSTRACT
@#[摘 要] 目的:制备双特异性CAR-T(bsCAR-T)细胞,观察其对表达表皮生长因子Ⅲ型突变阳性(EGFRvⅢ+,简称vⅢ+)和CD133+胶质瘤干细胞的靶向杀伤作用。方法:基于前期研制的vⅢ/CD133双特异性微抗体和二代CAR构建的双特异性CAR(bsCAR),制备慢病毒载体转染人外周血T细胞,FCM和WB法检测bsCAR转染效率和表达水平。bsCAR-T细胞和vⅢ+/CD133+ U87胶质瘤干细胞共培养,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、IFN-γ分泌实验检测其特异性杀伤作用和对IFN-γ分泌的促进作用。制备裸鼠vⅢ+/CD133+ U87干细胞移植瘤模型检测bsCAR-T细胞对移植瘤生长的抑制作用。结果:vⅢscFv和CD133scFv通过重叠PCR无缝连接入二代CAR表达框(S-vⅢscFv/CD133scFv-Hinge-TM-CD137-CD3z)中,然后克隆入pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP载体的EcoRⅠ和BamHⅠ位点(pbsCAR)。3种质粒(pVSV-G、pCMV-dR8.9和pbsCAR)共转染HEK293T细胞制备慢病毒载体,转染外周血T细胞,FCM检测bsCAR表达率为71.1%,WB法结果显示bsCAR表达正确。bsCAR-T细胞和vⅢ+/CD133+ U87干细胞共培养检测结果显示,bsCAR-T细胞对胶质瘤干细胞具有特异性杀伤作用,与效靶比呈正比;IFN-γ分泌量为(2 350.6±92) pg·mL-1,明显高于对照组(P<0.01)。裸鼠移植瘤动物模型显示,bsCAR-T细胞在体内具有明显的移植瘤抑制作用(P<0.01)。结论: bsCAR-T细胞能够特异性靶向杀伤vⅢ+/CD133+胶质瘤干细胞,实验结果为促进实体瘤的细胞免疫治疗提供了实验依据。
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Idioma:
Zh
Revista:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
Año:
2023
Tipo del documento:
Article