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Molecular response of pulp fibroblasts after stimulation with pulp capping materials
Modena, Karin Cristina da Silva; Calvo, Adriana Maria; Sipert, Carla Renata; Colombini-Ishikiriama, Bella Luna; Dionísio, Thiago José; Navarro, Maria Fidela de Lima; Atta, Maria Teresa; Santos, Carlos Ferreira.
Afiliação
  • Modena, Karin Cristina da Silva; Universidade de São Paulo. Bauru School of Dentistry. Department of Restorative Dentistry, Endodontics and Dental Materials. Bauru. BR
  • Calvo, Adriana Maria; Universidade de São Paulo. Bauru School of Dentistry. Department of Biological Sciences. SP. BR
  • Sipert, Carla Renata; Universidade de São Paulo. School of Dentistry. Department of Restorative Dentistry. São Paulo. BR
  • Colombini-Ishikiriama, Bella Luna; Universidade de São Paulo. School of Dentistry, Bauru School of Dentistry. Department of Pediatric Dentistry, Orthodontics and Public Health. Bauru. BR
  • Dionísio, Thiago José; Universidade de São Paulo. Bauru School of Dentistry. Department of Biological Sciences. SP. BR
  • Navarro, Maria Fidela de Lima; Universidade de São Paulo. Bauru School of Dentistry. Department of Restorative Dentistry, Endodontics and Dental Materials. Bauru. BR
  • Atta, Maria Teresa; Universidade de São Paulo. Bauru School of Dentistry. Department of Restorative Dentistry, Endodontics and Dental Materials. Bauru. BR
  • Santos, Carlos Ferreira; Universidade de São Paulo. Bauru School of Dentistry. Department of Biological Sciences. SP. BR
Braz. dent. j ; 31(3): 244-251, May-June 2020. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS, BBO - Odontologia | ID: biblio-1132303
Biblioteca responsável: BR1.1
ABSTRACT
Abstract This in vitro study evaluated cell viability and metabolism, nitric oxide release and production of two chemokines and one cytokine by cultured human dental pulp fibroblasts (HDPF) in contact with two glass ionomer cements (Ketac Molar-KM and Vitrebond-VB), Single Bond (SB) and calcium hydroxide (Dycal-DY). Cultures of HDPF were established by means of an explant technique. The specimens were prepared under sterile conditions and in disks measuring 5 mm x 2 mm obtained from a prefabricated mold and placed on a permeable membrane to avoid direct contact with the cells. Cytotoxicity was assessed by Trypan Blue exclusion method and 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Nitric oxide release in cell supernatant was detected by the Griess Method whereas stromal derived factor-1 alpha (SDF-1α or CXCL12), chemokine (C-X-C motif) ligand 8 [Interleukin 8 (IL-8 or CXCL8)] and interleukin-6 (IL-6) were detected by ELISA. RT-qPCR was employed for gene expression analysis. Statistical analyses were performed by One-way ANOVA followed by Tukey's post hoc test for materials independent of the time, and Two-way ANOVA followed by Bonferroni correction test for the comparisons between materials and experimental time (p<0.05). Cytotoxic tests showed significant differences only for DY. Protein levels and mRNA expression were significantly increased for IL-8 for both periods of time. IL-6 production increased when fibroblasts were stimulated by KM. SDF-1α protein production and mRNA expression were not affected by any of the materials. There was a decrease in nitrate/nitrite levels only for KM. Although DY caused intense cell death and did not stimulate the production of the inflammatory mediators evaluated in this work, it is known that this event seems to be fundamental for the process of repair of the pulp tissue and formation of mineralized barrier. KM and VB increased production of proteins related to the inflammatory process, thus favoring tissue repair. Therefore, although these glass ionomer cements did not lead to large cell death, they should be used with caution.
RESUMO
Resumo Este estudo avalia in vitro a viabilidade e metabolismo celular, a liberação de óxido nítrico e a produção de duas quimiocinas e uma citocina por fibroblastos de polpa dentária humana em cultura (FPDH) em contato com dois cimentos de ionômero de vidro (Ketac Molar-KM e Vitrebond-VB), Single Bond (SB) e hidróxido de cálcio (Dycal-DY). As culturas de FPDH foram estabelecidas por meio de uma técnica de explante. As amostras foram preparadas em condições estéreis e em discos de 5 mm x 2 mm, obtidas de um molde pré-fabricado e colocadas em uma membrana permeável (Maxicell 24 W 0,4 µm) para evitar o contato direto com as células. A citotoxicidade foi avaliada pelo método de exclusão de Trypan Blue e pelo ensaio de MTT. A liberação de óxido nítrico no sobrenadante celular foi detectada pelo método Griess, enquanto fator 1 derivado do estroma (SDF-1α ou CXCL12), interleucina-8 (IL-8 ou CXCL8) and interleucina-6 (IL-6) foram detectados por ELISA. RT-qPCR foi empregada para análise de expressão gênica. As análises estatísticas foram realizadas por ANOVA a 1 critério, seguida pelo pós-teste de Tukey para os materiais independentes do tempo, e ANOVA a 2 critérios, seguida pelo teste de correção de Bonferroni para comparações entre materiais e tempo experimental (p<0,05). Os testes citotóxicos mostraram diferenças significativas apenas para DY. Os níveis da proteína e a expressão de RNAm para IL-8 aumentaram significativamente para ambos os tempos estudados. A produção de IL-6 aumentou quando os fibroblastos foram estimulados por KM. A produção da proteína e a expressão de RNAm para SDF-1α não foram afetadas por nenhum dos materiais. Houve uma diminuição nos níveis de nitrato/nitrito apenas para KM. Embora o DY tenha causado intensa morte celular e não tenha estimulado a produção dos mediadores inflamatórios avaliados neste trabalho, sabe-se que esse evento parece ser fundamental para o processo de reparo do tecido pulpar e formação de barreira mineralizada. Os cimentos de ionômero de vidro utilizados aumentaram a produção de proteínas relacionadas ao processo inflamatório, favorecendo a reparação tecidual e, portanto, esses materiais, embora não causem grande morte celular, devem ser utilizados com cautela.
Assuntos


Texto completo: Disponível Coleções: Bases de dados internacionais Base de dados: BBO - Odontologia / LILACS Assunto principal: Polpa Dentária / Capeamento da Polpa Dentária Limite: Humanos Idioma: Inglês Revista: Braz. dent. j Assunto da revista: Odontologia Ano de publicação: 2020 Tipo de documento: Artigo País de afiliação: Brasil Instituição/País de afiliação: Universidade de São Paulo/BR

Texto completo: Disponível Coleções: Bases de dados internacionais Base de dados: BBO - Odontologia / LILACS Assunto principal: Polpa Dentária / Capeamento da Polpa Dentária Limite: Humanos Idioma: Inglês Revista: Braz. dent. j Assunto da revista: Odontologia Ano de publicação: 2020 Tipo de documento: Artigo País de afiliação: Brasil Instituição/País de afiliação: Universidade de São Paulo/BR
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