Avaliação da qualidade do DNA obtido de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade na identificação forense em odontologia legal / Evaluation of DNA quality obtained from stored human saliva and its applicability in forensic identification in forensic dentistry

RESUMO

A saliva pode ser utilizada como fonte eficiente de DNA para técnicas de identificação humana, as quais são aceitas como prova legal, sendo o parecer do profissional superlativo para a formulação da sentença. Esse material pode ser coletado de maneira indolor e não-invasiva e utilizado mesmo quando armazenado em diferentes condições. Este trabalho objetiva avaliar a qualidade do DNA obtido de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade da identificação de pessoas. Foram analisadas amostras salivares de n=100 sujeitos da pesquisa, coletadas nas formas de saliva in natura e saliva coletada de swab. A saliva foi armazenada à -20ºC. Após 7 dias, realizou-se a primeira etapa, quando o DNA foi extraído das 200 amostras de saliva utilizando-se a resina InstaGene (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) e, posteriormente, submetido à PCR e à eletroforese. Após 180 dias de armazenamento da saliva, repetiu-se a mesma técnica da primeira fase, porém em apenas 20 amostras, selecionadas aleatoriamente do total de 100 amostras de saliva coletadas por swab bucal. Os resultados da primeira etapa indicaram que o DNA foi extraído com sucesso em 96% das reações realizadas para as 200 amostras de saliva, fato observado também quando se analisou as amostras em separado, de saliva in natura (94%) e saliva advinda do swab (98%). Além disso, não houve diferenças estatisticamente significantes na extração do DNA entre as duas formas de coleta de saliva utilizadas. Na segunda fase, foi possível a detecção do gene alvo nas 20 amostras analisadas (100%).

ABSTRACT

The saliva can be used as efficient DNA source for human identification techniques in which they are accepted as forensic proof, being the superlative professional’s opinion for the sentence formulation. This material can be collected in a painless and noninvasive way and it is used even when stored in different conditions. This paper aims at evaluating DNA quality obtained from stored human saliva and its applicability in people identification. Saliva samples from n=100 research subjects were analyzed. They were collected in two ways in natura and swab. The saliva was stored at the temperature of -20°C. After 7 days, the first phase was performed, when the DNA was extracted from the 200 saliva samples using the InstaGene resin (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) and, subsequently, submitted to PCR and electrophoresis. After 180 days of the saliva storage, the same technique used in the first phase was repeated; however, in only 20 samples, selected at random from the total of 100 ones collected from mouth swab. The results of the first phase indicated that the DNA was successfully extracted in 96% of the reactions performed for the 200 saliva samples.