Utilização de biópsias gengivais minimamente invasivas para o estudo da expressão de mediadores inflamatórios e sua correlação com a expressão do fluido gengival em pacientes com periodontite severa / Use of minimally invasive gingival biopsies in the study of inflammatory mediators expression and their correlation with gingival fluid in patients with severe periodontitis

RESUMO

O objetivo deste estudo foi utilizar biópsias minimamente invasivas para avaliar a expressão de mediadores inflamatórios e sua correlação com o fluido gengival em pacientes com periodontite severa. O grupo teste compreendeu 22 pacientes com periodontite severa (idade média 45,5  DP 8,9 anos), analisados por sítios rasos e profundos, e o grupo controle por 14 pacientes periodontalmente saudáveis (idade média 39,35  DP 16,5 anos). As amostras do fluido gengival foram coletadas com papel absorvente, nos mesmos sítios de onde foram realizadas as biópsias, e quantificadas, por Luminex®, para IFN- γ, IL 1-β, IL-6, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IL-17F, sCD40L e TNFα. Foram coletadas biópsias, com um punch de 2mm de diâmetro nos grupos teste e controle. A avaliação imuno-histoquímica foi semiquantitativa, nas células epiteliais, plasmócitos, macrófagos, fibroblastos e células endoteliais, para a IL1-β, IFN-γ, IL-6 e IL-17. Foram observadas marcações imuno-histoquímicas, em todos os grupos celulares analisados, tanto nos pacientes com periodontite como nos controles, sem diferenças significativas entre eles. O fluido gengival apresentou maiores quantidades para os marcadores IL-1β e IL-23 nos sítios profundos. Não foram encontradas correlações significativas entre as marcações imuno-histoquímicas e o fluido gengival para os subgrupos analisados. Na análise comparativa entre as biópsias e o fluido gengival, a IL1-β mostrou alta concordância nos sítios rasos e profundos. Concluindo, a utilização padronizada de um punch de 2mm de diâmetro para biópsias em tecido periodontal mostrou- se viável, para estudos com imuno-histoquímica. O fluido gengival pode não expressar todos os marcadores do tecido correspondente, com variações dependendo do marcador analisado e das condições inflamatórias locais.

ABSTRACT

The aim of this study was to use minimally invasive biopsies to evaluate the expression of inflammatory mediators and their correlation with gingival fluid in patients with severe periodontitis. The test group comprised 22 patients with severe periodontitis (mean age 45.5  8.9 years SD), analyzed by shallow and deep sites and the control group for 14 periodontally healthy patients (mean age 39.35  SD 16.5 years). Gingival fluid samples were collected with absorbent paper in the same sites where biopsies were performed, and quantified by Luminex® to IFN-γ, IL-1 β, IL-6, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IL-17F, TNF and sCD40L. Biopsies were taken with a 2 mm diameter punch in both groups. Immunohistochemistry was semiquantitative evaluated, comprising epithelial cells, plasma cells, macrophages, fibroblasts and endothelial cells, to IL1-β, IFN-γ, IL-6 and IL-17. Immunohistochemical markers were observed in the analyzed cells groups, both in periodontitis patients as in controls, without significant differences between them. The gingival fluid showed higher amounts for IL-1β and IL-23 in deep sites. No significant correlations between immunohistochemical markers and GCF were found. In the comparative analysis between immunohistochemical markers and GCF, IL1-β showed high concordance in shallow and deep sites. In conclusion, the use of a standardized punch 2mm diameter for periodontal tissue biopsies proved to be feasible for studies with immunohistochemistry. The gingival fluid may not express all the markers of the corresponding tissue, with variations depending on the analysed marker and local inflammatory conditions.