Avaliação da alfa-glicosidase Cqm1 de Culex quinquefasciatus e o impacto de suas mutações na fisiologia de larvas / Evaluation of a-glucosidase Cqm1 from Culex quinquefasciatus and the impact of its mutations on larvae physiology

RESUMO

Lysinibacillus sphaericus (Lsp) e uma bacteria entomopatogena que produz a toxina Binaria (Bin) com atividade larvicida para culicideos. A sua acao em Culex quinquefasciatus depende da ligacao da toxina Bin a alfa-glicosidase (Aglu) Cqm1, que atua como receptor no epitelio intestinal de larvas. Na colonia R2362, foram caracterizados dois alelos de resistencia ao Lsp cqm1REC e cqm1REC-2, cujas mutacoes impedem a expressao da Aglu Cqm1. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade catalitica da Cqm1 e comparar a atividade alfa-glicosidase e o desenvolvimento pre-imaginal de larvas de individuos susceptiveis (S) e resistentes (R) para cada alelo. Para isto, foram avaliados os seguintes parametros atividade catalitica da Cqm1 recombinante; padrao de transcricao de outras Aglus paralogas a Cqm1; atividade de Aglus nativas em larvas; sobrevivencia de individuos frente a diferentes dietas. A Aglu Cqm1 mostrou atividade enzimatica otima a 37o C, pH 7,5-8,0 e utilizando o substrato sintetico pNalfaG. A atividade alfa-glicosidase total em larvas S e R foi similar, apesar da ausencia de expressao da Cqm1 nas larvas R. A investigacao in silico revelou 18 proteinas paralogas a Cqm1 e, dentre 11 investigadas, nove sao expressas em larvas S e R. A analise quantitativa de tres paralogas demonstrou que duas tem um padrao de transcricao mais elevado em larvas resistentes, sugerindo a existencia de um mecanismo de compensacao de expressao de alfa-glicosidases. O desenvolvimento pre-imaginal de larvas S foi decrescente nas seguintes dietas racao de gatos, racao de peixes, leite desnatado, extrato de levedura e sacarose. De uma forma global, a taxa de sobrevivencia de larvas R foi inferior a S em todas as dietas testadas. Os dados obtidos mostram que as mutacoes ligadas aos alelos cqm1REC e cqm1REC-2 nao parecem impactar a atividade Aglu nas larvas e que o custo biologico observado poderia estar relacionado a outros genes e vias metabolicas.