Edição do gene TACR1 em células HEK293T utilizando a técnica CRISPR/Cas9

ABSTRACT

TACR1 encodes the receptor of substance P, which has a neuromodulator role and is associated with inflammatory processes. In the context of neurodegenerative diseases such as osteoarthritis, studying the role of this gene in pathophysiology and nociception may be important to validate it as a molecular target for new therapeutic alternatives. The CRISPR/Cas9 techinique has been widely used to edit diverse cell types, resulting in decreasead, increased or blocked gene activity, or by integration of exogenous sequences into the cell DNA, and can be used to elucidate the role of TACR1 gene in osteoarthritis by its inactivaction. That way, the objective of this work was to performTACR1 gene edition in HEK293t cells by CRISPR/Cas9 techinique. The cloning of sgRNAs in. E.coli bacteria (Stbl3 lineage) was successfull and also the transfection of the cell line with the transformed plasmids.

RESUMO

O gene TACR1 codifica o receptor da substância P, que tem papel neuromodulador e está associado com processos inflamatórios. Dentro do contexto de doenças degenerativas como a osteoartrite, o estudo do papel desse gene na fisiopatologia e nocicepção nesta doença pode ser importante para validá-lo como alvo molecular a ser utilizado em novas propostas de alternativas terapêuticas. A técnica de CRISPR/Cas9 tem sido amplamente utilizada para transformar tipos celulares, diminuindo, aumentando ou bloqueando a atividade de algum gene, ou integrando sequências exógenas ao DNA da célula, e pode ser usada para elucidar o papel do gene TACR1 na osteoartrite por meio da sua inativação. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi realizar a edição do gene TACR1 em células HEK293T por meio da técnica de edição gênica CRISPR/Cas9. A clonagem dos sgRNAs em bactérias E.coli (linhagem Stbl3) teve sucesso bem como a transfecção da linhagem celular com os plasmídeos transformados.