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Caracterización proteómica de vesículas de membrana externa extraídas de Shigella sonnei / Proteomic characterisation of outer membrane vesicle extracted from Shigella sonnei
Padrón-Collaz, María de los A; Martínez-Cabrera, Ileana; J, Wheeler; Nisar, Sonia; Riverón-Martínez, Luís A; Martínez-Pozo, Miguel E; Soto-Rodríguez, Carmen R; Martínez-Fernández, Olga M; Diez-Martin, Ranset; Pérez-Quiñoy, José L; García-Imia, Luís; Talavera-Coronel, Arturo; Sierra-González, Gustavo V; Christopher, Jones.
Afiliação
  • Padrón-Collaz, María de los A; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Martínez-Cabrera, Ileana; Universidad de las Islas Baleares. España
  • J, Wheeler; Laboratory for Molecular Structure. National Institute for Biological Standards and Control. Reino Unido
  • Nisar, Sonia; Laboratory for Molecular Structure. National Institute for Biological Standards and Control. Reino Unido
  • Riverón-Martínez, Luís A; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Martínez-Pozo, Miguel E; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Soto-Rodríguez, Carmen R; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Martínez-Fernández, Olga M; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Diez-Martin, Ranset; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Pérez-Quiñoy, José L; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • García-Imia, Luís; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Talavera-Coronel, Arturo; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Sierra-González, Gustavo V; Instituto Finlay de Vacunas. La Habana. Cuba
  • Christopher, Jones; Laboratory for Molecular Structure. National Institute for Biological Standards and Control. Reino Unido
VACCIMONITOR ; 26(3)20170000. ilus
Artigo em Espanhol | CUMED | ID: cum-72038
Biblioteca responsável: CU1.1
Localização: CU1.1
RESUMEN
Las vacunas compuestas por vesículas de membrana externa (VMEs) previenen de manera exitosa la enfermedad meningocócica del serogrupo B. Esta plataforma tecnológica de obtención puede ser aplicada para otros patógenos bacterianos Gram negativos. Una vacuna de VMEs desarrollada contra Shigella sonnei fue obtenida a través de una extracción de componentes celulares y su caracterización por electroforesis en geles de poliacrilamida unidimensional (1D). Se estudiaron las mejores condiciones de solubilización de las muestras, separación electroforética e identificación a través de espectrometría de masas acoplada a cromatografía de alta presión después del corte de las bandas y su tratamiento enzimático con tripsina. En esta etapa se identificaron un total de 57 proteínas en 23 bandas (2,5 proteínas por banda escindida), 47 de las proteínas no repetidas. Las proteínas inmunogénicas presentes en VMEs de S. sonnei fueron cuantificadas en cuanto a masa molecular por 1D-Western blotting en membranas de nitrocelulosa con anticuerpos obtenidos a partir de ratones inmunizados con las VMEs. Como que las bandas electroforéticas 1D contenían más de una proteína, se estudiaron las mejores condiciones de separación por el método de electroforesis bidimensional (2D) para el establecimiento del mapa proteico; tal que el incremento del tamaño de las tiras, el tiempo de focalización y la aplicación catódica garantizaron la mayor resolución(AU)
ABSTRACT
Outer membrane vesicles (OMVs) vaccines successfully prevent Group B meningococcal disease. This platform technology may be applied against other Gram negative bacterial pathogens. An OMV vaccine against Shigella sonnei was prepared by detergent extraction of cells and characterised by one-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (1D). The protein components were quantified by staining and scanning and the composition of bands were defined by coupled high-performance low chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry after band excision and in-gel trypsin digestion. 57 proteins contained in 23 bands (2.5 proteins/split band) were detected, 47 of them were not repeated. The S. sonnei OMVs immunogenic proteins were identified by 1D-immunoblotting, after transfer of proteins to a nitrocellulose membrane and treatment with antibodies generated by immunisation of mice with the OMVs. The bands detected by 1D had more than a single proteins, that is why we studied the best conditions for molecular separation by two-dimension electrophoresis (2D) for establishing the protein map; such that the increase of strips size, time of isoelectric focusing (IEF) and cup-cathodic loading guaranteed the highest resolution(AU)
Assuntos

Texto completo: Disponível Coleções: Bases de dados nacionais / Cuba Contexto em Saúde: Doenças Negligenciadas Problema de saúde: Doenças Negligenciadas / Zoonoses Base de dados: CUMED Assunto principal: Shigella sonnei / Vacinas Idioma: Espanhol Revista: VACCIMONITOR Ano de publicação: 2017 Tipo de documento: Artigo Instituição/País de afiliação: Instituto Finlay de Vacunas/Cuba / Laboratory for Molecular Structure. National Institute for Biological Standards and Control/Reino Unido / Universidad de las Islas Baleares/España
Texto completo: Disponível Coleções: Bases de dados nacionais / Cuba Contexto em Saúde: Doenças Negligenciadas Problema de saúde: Doenças Negligenciadas / Zoonoses Base de dados: CUMED Assunto principal: Shigella sonnei / Vacinas Idioma: Espanhol Revista: VACCIMONITOR Ano de publicação: 2017 Tipo de documento: Artigo Instituição/País de afiliação: Instituto Finlay de Vacunas/Cuba / Laboratory for Molecular Structure. National Institute for Biological Standards and Control/Reino Unido / Universidad de las Islas Baleares/España
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