La LDL agregada induce la expresión y la activación de factor tisular en células vasculares mediante un mecanismo inhibible por pravastatina / Aggregated low-density lipoprotein induces tissue factor expression and activity in vascular cells through a mechanism susceptible to pravastatin-mediated inhibition

RESUMEN

Introducción. La captación de lipoproteína de baja densidad (LDL) modificada por agregación (LDLag) induce la expresión y la activación del factor tisular (FT) en células musculares lisas de la pared vascular (CMLV). Nuestro objetivo fue investigar el mecanismo involucrado en la inducción de FT por LDLag y la regulación de dicho mecanismo por la pravastatina. Métodos. Las CMLV se preincubaron durante 4 h con pravastatina (0,5 mM), sin y con mevalonato (0,1 mM), geranilgeranil pirofosfato (GGPP) (10 mM) o farnesil pirofosfato (FPP) (10 mM). Posteriormente, las CMLV se incubaron con LDL nativa (LDLn) o LDLag (100 mg/ml) durante 18 h. La expresión de FT se analizó mediante PCR a tiempo real. La actividad procoagulante de FT (APC) se evaluó mediante el ensayo de generación de factor X activado (Xa). La translocación de Rho A se estudió mediante la detección de Rho A en el citoplasma y la membrana. El efecto de la inhibición de Rho A se analizó en CMLV incubadas con la exoenzima C3 (inhibidor específico de Rho A) (25 mg/ml, 24 h). Resultados. Las LDLag indujeron la expresión y la activación de FT concomitantemente al aumento del valor de Rho A en la membrana (23). La pravastatina (0,5 mM) inhibió la expresión de ARNm y la actividad de FT inducida por LDLag en el 52,33 ± 5,17% y en el 28 ± 2%, respectivamente. Este efecto se revirtió por GGPP pero no por FPP, lo que sugiere la implicación de una proteína geranilgeranilada. La exoenzima C3, un inhibidor específico de Rho A, inhibió la expresión de ARNm y la activación de FT inducida por LDLag en el 42 ± 3,3% y en el 41 ± 2,5%, respectivamente. Conclusión. La LDLag aumenta el FT en CMLV mediante un incremento en los valores de Rho A en la membrana y la pravastatina previene este efecto impidiendo la translocación de Rho A. Nuestros resultados contribuyen a explicar el papel crucial de Rho A en la patogénesis de la aterotrombosis y el potencial de las estatinas para prevenir la aterotrombosis (AU)

ABSTRACT

Introduction. Aggregated low-density lipoprotein (agLDL) strongly induces tissue factor (TF) expression and activation in human vascular smooth muscle cells (VSMC). The aim of this study was to investigate the mechanism involved in agLDL-TF overexpression and agLDL-TF activation, as well as regulation of this mechanism by pravastatin. Methods. VSMC were preincubated with pravastatin (0.5 mM) with or without mevalonate (0.1 mM), geranylgeranyl pyrophosphate (GGPP) (10 mM) and farnesyl pyrophosphate (FPP) (10 mM). The cells were then exposed to native LDL (nLDL) or agLDL (100 mg/ml) for 18 h. TF expression was measured by real-time PCR. TF activity was analyzed by the factor Xa generation test. Rho A traslocation was determined by detection of Rho A antigen in cytoplasmic and membrane fractions. The effect of Rho A inhibition on TF expression and activity was analyzed by preincubation of VSMC with exoenzyme C3 (25 mg/ml, 24 hours). Results. AgLDL significantly increased TF expression and activity concomitantly with an increase in Rho A membrane levels (by 2-fold). Pravastatin (0.5 mM) inhibited agLDL-TF mRNA overexpression and agLDL-TF activation by 52.33 ± 5.17% and 28 ± 2%, respectively. These effects were reverted by GGPP but not by FPP, suggesting involvement of a geranylgeranyl protein. Exoenzyme C3 (a specific Rho A inhibitor) prevented agLDL-TF overexpression and activation by 42 ± 3.3% and 41 ± 2.5%, respectively. Conclusion. AgLDL internalization increases TF expression and activation through Rho A activation while pravastatin prevents this effect by impairing Rho A traslocation. Our results help to explain the major role of Rho A activation in the pathogenesis of atherothrombosis and the potential of statins in atherothrombosis prevention (AU)