Caracterización del cultivo primario epitelial de conjuntiva humana / Characterization of epithelial primary culture from human conjunctiva

RESUMEN

OBJETIVO: Evaluar diferentes cultivos primarios de conjuntiva humana enriquecidos con suero fetal bovino, suero autólogo y suero autólogo rico en plaquetas, sobre un soporte de membrana amniótica humana y cápsula anterior del cristalino. MÉTODOS: Ciento cuarenta y ocho explantes de conjuntiva humana fueron cultivados en CnT50® enriquecido con 1, 2,5, 5 y 10% en suero fetal bovino, suero autólogo y suero autólogo rico en plaquetas. Las muestras de conjuntivales fueron incubadas a 37 °C, 5% CO2 y 95% HR, durante 3 semanas. RESULTADOS: Todos los cultivos primarios tuvieron el fenotipo típico de las células epiteliales de la conjuntiva. Los cultivos mostraron células secretoras MUC5AC-positiva, células conjuntivales CK19-positiva y células conjuntivales no secretoras MUC4-positiva, pero sin fenotipo corneal (CK3-negativa) ni fibroblastos (CD90-negativa). CONCLUSIONES: Las células epiteliales progenitoras de la conjuntiva se mantuvieron en todos los cultivos, por lo que un cultivo celular en CnT50® enriquecido con suero autólogo entre el 1 y 5% sobre membrana amniótica humana puede proporcionar la mejor información de la diferenciación de las células epiteliales para la reconstrucción de la superficie conjuntival

ABSTRACT

OBJECTIVE: To evaluate primary cultures from human conjunctiva supplemented with fetal bovine serum, autologous serum, and platelet-rich autologous serum, over human amniotic membrane and lens anterior capsules. METHODS: One-hundred and forty-eight human conjunctiva explants were cultured in CnT50® supplemented with 1, 2.5, 5 and 10% fetal bovine serum, autologous serum and platelet-rich autologous serum. Conjunctival samples were incubated at 37 °C, 5% CO2 and 95% HR, for 3 weeks. RESULTS: The typical phenotype corresponding to conjunctival epithelial cells was present in all primary cultures. Conjunctival cultures had MUC5AC-positive secretory cells, K19-positive conjunctival cells, and MUC4-positive non-secretory conjunctival cells, but were not corneal phenotype (cytokeratin K3-negative) and fibroblasts (CD90-negative). CONCLUSIONS: Conjunctiva epithelial progenitor cells were preserved in all cultures; thus, a cell culture in CnT50® supplemented with 1 to 5% autologous serum over human amniotic membrane can provide better information of epithelial cell differentiation for the conjunctival surface reconstruction