Condiciones optimas de manipulación para la cuantificación de fibronectina en saliva / Optimal assay conditions for quantifying fibronectin in saliva

RESUMEN

Introducción: La fibronectina (Fn) es una glucoproteína presente en múltiples fluidos y tejidos orgánicos, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas. También en la saliva puede detectarse aunque en muy pequeñas cantidades y frecuentemente en cadenas fragmentadas, induce agregación bacteriana y sus niveles se reducen cuando aumentan los niveles de bacterias cariogénicas o periodontopatógenas. La capacidad infectiva de la saliva de los pacientes infectados por el virus de la inmunodificiencia humana (VIH) se ha relacionado con los niveles de esta proteína. En algunas enfermedades crónicas de la mucosa oral como es el liquen plano, la concentración de Fn salivar se encuentra reducida. También su cuantificación varía en presencia de algunos tumores como el carcinoma oral de células escamosas, aunque no puede considerarse un factor específico. Objetivo: Debido a la baja concentración de Fn en la saliva y a su labilidad en la forma soluble, las condiciones de recogida y conservación de las muestras son extremadamente importantes, por ello nos proponemos en el presente trabajo estandarizar dichas condiciones con el fin de poder cuantificarla de manera óptima. Material y método: Se determinó la concentración de Fn en saliva humana de 20 personas sanas de edades comprendidas entre 28 y 54 años mediante técnica de ELISA, comparando la concentración de la proteína en muestras frescas, conservadas 24 h a 4ºC, o congeladas a - 40ºC durante diferentes periodos de tiempo. Resultados y conclusiones: Tras comparar diferentes formas de conservación de las muestras de saliva, observamos que las condiciones óptimas son recoger las muestras en tubos de vidrio, cuantificarlas inmediatamente tras su recogida o como máximo 24 horas después, conservándolas a 4ºC. La congelación y posterior descongelación para su cuantificación induce pérdidas de hasta el 60 % de la proteína (AU)

ABSTRACT

Introduction: Fibronectin (Fn) is a glycoprotein that is present in many body fluids and tissues in both physiological and pathological conditions. It can also be detected in the saliva, although only in very small quantities and frequently in broken chains. It induces bacterial aggregation and its levels fall when those of cariogenic or periodontal pathogenic bacteria rise. The infective capacity of the saliva of patients infected by human immunodeficiency virus (HIV) has been linked to the levels of this protein. In some chronic conditions of the oral mucosa, such as oral lichen planus, the concentration of salivary fibro-nectin is lower than usual. Fibronectin quantity also varies in the presence of some tumours, such as oral squamous cell carcinoma, although it cannot be considered a specific factor. Aims: Due to the low Fn concentration in saliva and its lability in the soluble form, sample collection and conservation conditions are extremely important. The aim of this study is therefore to standardise these conditions so that the Fn can be quantified in an optimum manner. Materials and methods: The Fn concentration in human saliva was determined in 20 healthy subjects aged between 28 and 54 by means of the ELISA technique and the concentration of the protein in fresh samples kept at 4ºC for 24 hours was compared with that of frozen samples kept at -40ºC for different periods of time. Results and Conclusions: After comparing different ways of conserving the saliva samples, we found that the optimum conditions were to collect the samples in glass tubes and to quantify them immediately after collection or conserve them at 4ºC and quantify them within a maximum of 24 hours. Freezing and later thawing for quantification induced losses of up to 60% of the protein (AU)