Análisis de la metilación de la región promotora del gen BMPR2 en pacientes con hipertensión arterial pulmonar / Methylation Analysis of the BMPR2 Gene Promoter Region in Patients With Pulmonary Arterial Hypertension

RESUMEN

Introducción: La hipertensión arterial pulmonar es una enfermedad infrecuente caracterizada por una obstrucción progresiva de las arterias pulmonares. El receptor tipo II de la proteína ósea morfogenética (BMPR2) es el principal gen relacionado con esta enfermedad. EL objetivo de este trabajo fue analizar el patrón de metilación de la región promotora del gen BMPR2 en individuos con hipertensión arterial pulmonar y controles. Métodos: Se analizó la región a estudio con los softwares Methyl Primer Express® v.1.0 y MatInspector. El ADN genómico, obtenido a partir de sangre periférica, fue modificado con bisulfito de sodio. La metilación se analizó utilizando PCR específica de metilación. Como control positivo de metilación se utilizó ADN tratado con CpG metiltransferasa y como control positivo de expresión se utilizó ADN del cultivo celular H1299. Resultados: Se ha identificado una isla CpG susceptible de presentar metilación en la región promotora del gen que contiene secuencias específicas como sitios de unión a factores de trascripción NIT-2 (global-acting regulatory protein), sex-determining region Y y heat shock factor. No se han encontrado indicios de metilación en los pacientes ni en los controles. En las células H1299, que expresan el gen BMPR2, no se ha identificado metilación en la isla CpG analizada. Conclusiones: No se detectaron indicios de metilación en la región promotora a estudio en pacientes y controles, siendo esta la región más adecuada para realizar el estudio debido al alto número de sitios de unión a factores de transcripción que podrían estar involucrados en la correcta funcionalidad del gen

ABSTRACT

Introduction: Pulmonary arterial hypertension is characterizated by obstruction of the pulmonary arteries. The gene mainly related to pathology is the bone morphogenetic protein receptor type II(BMPR2). The aim of this study was to analyze the methylation pattern of the BMPR2promoter region in patients and controls. Methods: We used Methyl Primer Express® v.1.0 and MatInspector softwares to analyze this region. Genomic DNA obtained from the peripheral blood of patients and controls was modified with sodium bisulphite. Methylation was analyzed using methylation-specific PCR. DNA treated with CpG methyltransferase was used as a positive control for methylation and H1299 cell culture DNA was used as positive control for gene expression. Results: We identified a CpG island, which may have been methylated, in the BMPR2 promoter region, in addition to NIT-2 (global-acting regulatory protein), sex-determining region Y) and heat shock factor transcription factor binding sites. We found no evidence of methylation in patients and controls. No methylated CpG sites were identified in H1299 cells expressing theBMPR2 gene. Conclusions: The BMPR2 promoter region is the most suitable for study because of the high number of transcription factor binding sites that could alter gene function. No evidence of methylation was detected in this region in patients and controls