Enriquecimiento-mejora en la eficacia de la realización de la reacción en cadena de la polimerasa de patógenos en alimentos / Enrichment-improvement in the effectiveness of the implementation of the polymerase chain reaction of pathogens in food

RESUMEN

Objetivo. Mejorar la eficacia de los ensayos cualitativos por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de patógenos en alimentos. Al realizar un enriquecimiento consistente en hacer una dilución inferior a la 1/10 se pretende adelantar en tiempo, reducir el gasto de medios, se procura posibilitar el completar hasta el 100% las muestras a realizar en una PCR y no disminuir la carga celular diana del alimento. Métodos. Investigación de la presencia o ausencia de una bacteria patógena en un alimento y su concentración por mililitro de disolución, siguiendo el método tradicional a distintas diluciones, en dos matrices. Resultados. Los resultados obtenidos en el experimento con un patógeno en alimentos, evidencia que con diluciones inferiores a 1/10, la concentración bacteriana para un mínimo de horas de incubación adelanta la detección por PCR del ácido desoxirribonucleico (ADN) diana, con valores de ufc/ml por encima de 1x103 . Por tanto el tiempo de incubación en un caldo de enriquecimiento se acorta, así como los volúmenes de las disoluciones a incubar. Y de este modo solo es necesario un operario y una estufa de incubación para realizar todas las tareas. Conclusiones. Mayor eficacia al necesitarse menos medios materiales y horas de trabajo. Realización de mayor número de muestras en una misma jornada de trabajo (se posibilita realizar el total de muestras que admite el termociclador por cada puesta en funcionamiento), se acorta el tiempo de análisis en siete horas como mínimo

ABSTRACT

Objective. Improve the effectiveness of the tests by qualitative polymerase chain reaction (PCR) of pathogens in food. When performing a enrichment consists in making a lower dilution to the 1/10 is intends to bring forward in time, reduce the cost of media, it seeks to enable the complete up to 100% of the samples to perform in a PCR and does not decrease the load cell Diana of the food. Methods. Investigation of the presence or absence of a pathogenic bacterium in food and its concentration per millilitre of dissolution, following the traditional method in different dilutions, in two different types of food. Results. The results obtained in the experiment with a pathogen in food, evidence that using dilutions lower than 1/10, the bacterial concentration for a minimum number of hours of incubation anticipates the detection by PCR of deoxyribonucleic acid (DNA) target, with values of cfu/ml above 1x103 . Therefore the incubation time in an enrichment broth and the volumes of the solutions are reduced. And it is only needed one operator and one incubator for all tasks. Conclusions. The efficacy increases because are needed less material and working hours. Testing more samples in the same working day (makes possible to perform all samples that supports the thermal cycler for each start-up) the analysis time decreases in seven hours at least