Molecular characterization of KPC-producing Klebsiella pneumoniae isolated from patients in a Public Hospital in Caracas, Venezuela / Caracterización molecular de aislados de Klebsiella pneumoniaeproductores de carbapenemasas tipo KPC provenientes de pacientes de un hospital público en Caracas, Venezuela

ABSTRACT

Introduction: Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC)-producing bacteria are amongst the most important causative agents of nosocomial infections worldwide. Isolates of this bacterium have been identified in Venezuela but little is known about their local spread. The aim of this study was to perform the molecular characterization of KPC-producing strains isolated from 2012 to 2013 in a public hospital in Caracas, Venezuela. Methods: Twenty-two K. pneumoniae clinical isolates phenotypically classified as KPC producing were subjected to PCR screening for the presence of blaKPC genes and their location within transposon Tn4401. The blaKPC PCR product was sequenced to identify the KPC alleles. Genotypic analysis was performed by means of repetitive extragenic palindromic PCR (rep-PCR) and Multi Locus Sequence Typing (MLST). Finally, conjugation and electroporation assays were used to determine whether the blaKPC genes were found in plasmids. Results: All isolates contained the blaKPC-2 variant, and 21 of the 22 were associated with the Tn4401b isoform. The strains were distributed in 8 sequence types (ST), three of which were new. Conjugation and electroporation assays indicated that 95.5% (n=21/22) of the isolates contained the blaKPC gene in plasmids. Conclusions: This study on circulating bacterial strains and the identification of KPC alleles may help to understand the routes of dissemination and control their spread within this hospital (AU)

RESUMEN

Introducción: Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasas tipo KPC es uno de los principales agentes causantes de infecciones nosocomiales a nivel mundial. En Venezuela se han identificado aislados de esta bacteria, sin embargo, se conoce poco sobre su dispersión. El objetivo de este estudio fue realizar la caracterización molecular de aislados de K. pneumoniae productores de KPC provenientes de un hospital público en Caracas, Venezuela, durante los años 2012 y 2013. Métodos: Se analizaron 22 aislados de K. pneumoniae clasificados fenotípicamente como productores de KPC, se les realizó la detección del gen blaKPC así como su ubicación en el transposón Tn4401 mediante PCR. El producto de PCR del gen blaKPC se secuenció para identificar los alelos circulantes. El análisis genotípico se realizó empleando las técnicas de amplificación por PCR de las secuencias repetidas extragénicas palindrómicas (rep-PCR) y la secuenciación de múltiples loci (MLST). Mediante ensayos de conjugación o electroporación, se determinó si los genes blaKPC se encontraban en plásmidos. Resultados: Los 22 aislados contenían una variante del gen blaKPC-2 pero 21 de ellos estaban asociados a la isoforma Tn4401b y se distribuyeron en 8 secuencias tipo (ST), siendo tres de ellas nuevas. Los ensayos de conjugación y electroporación indicaron que el 95,5% (n=21/22) de los aislados portaban al gen blaKPC en plásmidos. Conclusión: El estudio de aislados clínicos circulantes así como la identificación de los alelos del gen blaKPC podría ayudar a conocer las rutas de diseminación y a controlar su propagación en este hospital (AU)