Fast protocol for the production of Histoplasma capsulatum antigens for antibody detection in the immunodiagnosis of histoplasmosis / Protocolo rápido de producción de antígenos de Histoplasma capsulatum para la detección de anticuerpos en el inmunodiagnóstico de la histoplasmosis

ABSTRACT

Background. Current methods for the production of Histoplasma capsulatum antigens are problematic in terms of standardization, specificity, stability, repeatability and reproducibility. Aims. In this study, we sought to optimize the methodology for producing H. capsulatum antigens, and to evaluate its applicability. Methods. Antigenic preparations obtained from 12 H. capsulatum isolates were evaluated by double immunodiffusion and immunoblotting assays against homologous and heterologous sera. Results. The evaluated and optimized protocol allowed a more stable production, as well as repeatable, reproducible, with shorter culture time and less costly. By double immunodiffusion and immunoblotting assays, the best pattern of reactivity was observed for antigens obtained with 33 days of culture from the isolates 200 and 406 against the M antigen and for the isolate 200 with 15 days against H antigen. The SDS-PAGE presented antigenic components of molecular masses between 17 and 119kDa. The immunoblotting sensitivity was 95.5% and 100% with histoplasmosis sera from ill patients and sera from H. capsulatum infected but otherwise healthy patients, respectively, to the antigen derived from isolates 200 and 406. Conclusions. We suggest the employment of the antigen from isolate 200, with 15 or 30 days of culture, in the double immunodiffusion and immunoblotting assays due to its good ability to discriminate both sera from patients with histoplasmosis illness and histoplasmosis infection, in addition to its high specificity against heterologous sera (AU)

RESUMEN

Antecedentes. Los métodos actuales para la producción de antígenos de Histoplasma capsulatum son problemáticos en términos de estandarización, especificidad, estabilidad, repetitividad y reproducibilidad. Objetivos. En este estudio se buscó optimizar la metodología para la producción de antígenos y evaluar su aplicabilidad. Métodos. Las preparaciones antigénicas obtenidas de 12 cepas de H. capsulatum se evaluaron por doble inmunodifusión en gel de agar e inmunotransferencia frente a sueros homólogos y heterólogos. Resultados. El protocolo evaluado y optimizado permitió mayor sensibilidad en la producción, más estabilidad, repetitividad y reproducibilidad con menos tiempo de cultivo y menor coste. Los mejores patrones de reactividad por inmunodifusión en gel de agar e inmunotransferencia se observaron en el antígeno M obtenido tras 33 días de cultivo de las cepas 200 y 406, y en el antígeno H de la cepa 200 tras 15 días de cultivo. Con la técnica SDS-PAGE se separaron componentes antigénicos de masas moleculares entre 17 y 119kDa. La sensibilidad de la inmunotransferencia fue del 95,5% y del 100% con sueros obtenidos de pacientes con enfermedad y con sueros de pacientes infectados, pero sanos, respectivamente, con antígenos derivados de las cepas 200 y 406. Conclusiones. Sugerimos el empleo del antígeno de la muestra 200, con 15 o 30 días de cultivo, en los ensayos de doble inmunodifusión en gel e inmunotransferencia debido a su buena capacidad para discriminar los sueros de pacientes enfermos de histoplasmosis y los de pacientes portadores sanos, además de su elevada especificidad frente a sueros heterólogos (AU)