Desarrollo de un método de detección de Ocratoxina A (OTA) mediante Cromatografía Líquida de Alta Resolución con Detector de Masas en Tiempo de Vuelo / Development of a method for the Ochratoxin A (OTA) detection by High Resolution Liquid Chromatography with Time Mass Detector

RESUMEN

Antecedentes La ocratoxina A (OTA) es una micotoxina producida por algunos hongos (Aspergillus y Penicillium). Puede aparecer en diversos alimentos dependiendo de las condiciones de producción y almacenamiento. Presenta propiedades carcinógenas, nefrotóxicas, teratógenas, inmunotóxicas y neurotóxicas. Es tóxica por inhalación y por ingestión, presenta una elevada estabilidad y su obtención es relativamente sencilla, pudiendo representar un serio problema de salud pública y seguridad. Por ello existe la necesidad de desarrollar métodos de detección rápidos y específicos, que contribuyan a garantizar la seguridad de los ciudadanos. En este sentido, la cromatografía líquida acoplada a un detector de masas de tiempo de vuelo (HPLC-MSD (TOF)) se revela como una técnica diagnóstica muy adecuada para conseguir una detección rápida y específica de dicha micotoxina. Objetivo: Desarrollo de un método de detección de OTA, rápido y específico mediante HPLC-MSD (TOF). Material y Métodos: Se realizaron 36 ensayos con diferentes condiciones cromatográficas y espectrométricas. En todos los casos se utilizó un HPLC 1200 y un MSD-TOF 6210, con fuente de ionización electrospray (Agilent Technologies). Resultados: El cromatograma obtenido mostró el pico de OTA a un tiempo de retención de 1,791 ± 0,009 minutos. En su espectro de masas se observa el ion molecular [M+H]+ a 404,07986 uma y su perfil isotópico característico. Conclusiones: El método optimizado mediante HPLC-MSD (TOF) para la detección de OTA es rápido y específico. Este método podría ser adecuado para la detección de otras toxinas, permitiendo crear una base de datos para toxinas susceptibles de ser utilizadas como agentes bioterroristas

ABSTRACT

Antecedents Ochratoxin A (OTA) is a mycotoxin produced by some fungi (Aspergillus y Penicillium). It can be found in several types of food, depending on both production and storage conditions. It has carcinogenic, nephrotoxic, teratogenic, immunotoxic and neurotoxic properties. It is toxic by inhalation and by ingestion. Since this toxin has a high stability and its extraction is relatively simple, it represents a serious public health and safety problem. Therefore, in order to help ensure the safety of all the citizens, it is necessary to develop a fast and sensitive ochratoxin detection method. In this sense, liquid chromatography coupled to a time-of-flight mass detector (HPLC-MSD (TOF)) is revealed as a very suitable diagnostic technique to achieve a rapid and specific detection of this mycotoxin. Aim: Development of a fast and specific method of OTA using HPLCMSD (TOF). Material and Methods: Thirty-six assays were tested with different chromatographic and spectrometric conditions. In all the assayed cases, HPLC 1200 and an MSD (TOF) 6210 with electrospray ionization source were used, (Agilent Technologies). Results: The chromatogram obtained showed the peak of OTA at a retention time of 1,791 ± 0,009 minutes. In its mass spectrum it is observed both the molecular ion [M+H]+ at 404,07986 uma and its characteristic isotopic profile. Conclusions: The OTA detection method optimized by HPLC-MSD (TOF) is fast and specific. This method could be suitable for the detection of other toxins, allowing the creation of a database for toxins suspected of being used as bioterrorist agents (or biological warfare agents)