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Quantitative, absolute count-based T-Cell analysis of CD69 upregulation as a new methodology for in vitro diagnosis of delayed-type hypersensitivity reaction to nickel
Koren, Ana; Silar, M; Rupnik, H; Zidarn, M; Korosec, P.
Afiliação
  • Koren, Ana; University Clinic of Respiratory and Allergic Diseases Golnik. Golnik. Slovenia
  • Silar, M; University Clinic of Respiratory and Allergic Diseases Golnik. Golnik. Slovenia
  • Rupnik, H; University Medical Centre Ljubljana. Department of Dermatovenereology. Ljubljana. Slovenia
  • Zidarn, M; University Clinic of Respiratory and Allergic Diseases Golnik. Golnik. Slovenia
  • Korosec, P; University Clinic of Respiratory and Allergic Diseases Golnik. Golnik. Slovenia
J. investig. allergol. clin. immunol ; 29(4): 287-293, 2019. tab, graf
Artigo em Inglês | IBECS | ID: ibc-188749
Biblioteca responsável: ES1.1
Localização: BNCS
ABSTRACT

BACKGROUND:

T cells play a major role in delayed-type hypersensitivity reactions. Their reactivity can be assessed by measuring the upregulation of the activation marker CD69, followed by assessment of proliferation and cytokine production. The aim of our study was to develop a novel, whole blood-based, quantitative, absolute count activation index (AI) for analysis of CD69 upregulation in various subsets of T cells in nickel-hypersensitive patients and compare it with previously reported approaches.

METHODS:

The study population comprised 10 patients with nickel allergy and 9 healthy controls. CD69 expression of CD3+, CD3+CD4+, and CD3+CD8+ T cells in heparinized blood was determined with flow cytometry after incubation with nickel sulfate for 48 hours. The absolute count of CD69+ cells was determined using microbeads. Production of the cytokines IL-2, IL-5, IL-13, and IFN-γ was determined after stimulation of peripheral blood mononuclear cells with nickel sulfate for 48 hours.

RESULTS:

We showed absolute AI to be the most sensitive approach. The index was calculated as the ratio of the absolute count of nickel-stimulated CD69-positive T cells to the absolute count of CD69-positive T cells in nonstimulated blood. This novel quantitative approach was more discriminative than previously reported approaches in which the T-cell CD69 percentage AI and cytokine production are measured.

CONCLUSIONS:

Our results demonstrated that measuring the absolute CD69 AI is a novel and accurate approach for quantification of antigen-specific T cells in the blood of patients with hypersensitivity reactions to nickel. This approach may be useful for better in vitro assessment of patients with delayed-type hypersensitivity reactions
RESUMEN
ANTECEDENTES Los linfocitos T juegan un papel importante en las reacciones de hipersensibilidad de tipo retardado. Su actividad puede evaluarse midiendo la expresión del marcador de activación CD69, seguido de la proliferación y la producción de citocinas. El objetivo de nuestro estudio ha sido el desarrollar un novedoso análisis cuantitativo del índice de activación absoluto (AI) en sangre completa de la expresión de CD69, en diferentes subconjuntos de linfocitos T, en pacientes con hipersensibilidad al níquel, y compararlo con los métodos existentes.

MÉTODOS:

Se estudiaron diez pacientes con alergia al níquel y nueve controles sanos. La expresión de CD69 de los linfocitos T CD3+, CD3+CD4+ y CD3+ CD8+ en sangre heparinizada se determinó con citometría de flujo, después de una incubación con sulfato de níquel durante 48 h. El recuento absoluto de células CD69+ se determinó con microesferas. La producción de las citocinas IL-2, IL-5, IL-13 e IFN-γ se cuantificó después de la estimulación de células mononucleares periféricas, durante 48 h, con sulfato de níquel.

RESULTADOS:

Se demuestra que la determinación del índice AI absoluto es la metodología más sensible. Se calculó como la relación entre el recuento absoluto de linfocitos T CD69-positivos estimulados con níquel y el recuento absoluto de linfocitos T CD69-positivos en sangre no estimulada. Este nuevo enfoque cuantitativo fue más discriminativo que los enfoques publicados previamente en los que se midió el porcentaje de CD69 de linfocitos T y la producción de citocinas.

CONCLUSIONES:

Nuestros resultados demostraron que la medición del AI absoluto de CD69 es un enfoque nuevo y preciso para cuantificar los linfocitos T específicos de antígeno en la sangre de pacientes con reacciones de hipersensibilidad al níquel. Este enfoque puede ser útil para una mejor evaluación in vitro de los pacientes con reacciones de hipersensibilidad de tipo retardado
Assuntos

Texto completo: Disponível Coleções: Bases de dados nacionais / Espanha Base de dados: IBECS Assunto principal: Antígenos de Diferenciação de Linfócitos T / Antígenos CD / Contagem de Linfócitos / Lectinas Tipo C / Hipersensibilidade Tardia / Níquel Limite: Humanos Idioma: Inglês Revista: J. investig. allergol. clin. immunol Ano de publicação: 2019 Tipo de documento: Artigo Instituição/País de afiliação: University Clinic of Respiratory and Allergic Diseases Golnik/Slovenia / University Medical Centre Ljubljana/Slovenia

Texto completo: Disponível Coleções: Bases de dados nacionais / Espanha Base de dados: IBECS Assunto principal: Antígenos de Diferenciação de Linfócitos T / Antígenos CD / Contagem de Linfócitos / Lectinas Tipo C / Hipersensibilidade Tardia / Níquel Limite: Humanos Idioma: Inglês Revista: J. investig. allergol. clin. immunol Ano de publicação: 2019 Tipo de documento: Artigo Instituição/País de afiliação: University Clinic of Respiratory and Allergic Diseases Golnik/Slovenia / University Medical Centre Ljubljana/Slovenia
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