Localización citoquímica ultraestructural de la actividad de ATPasa de Ca²+ en membranas de eritrocitos humanos invadidos por Plasmodium falciparum / Ultrastructural cytochemical localization of the Ca²+ ATPase activity in the membrane of human erythrocytes invaded by Plasmodium falciparum

RESUMEN

Durante el proceso de invasión del eritrocito humano por Plasmodium falciparum el calcio juega un papel importante y su concentración es aumentada notablemnte con relación al eritrocito normal. En este trabajo se propuso determinar la presencia de bombas de calcio como la ATPasa de ca²+ en membranas de eritrocitos invadidos, con el fin de explicar el papel mediador que dicha bomba puede tener en el trasporte de calcio durante la invasión. Para detectar dicha actividad de la ATPasa de Ca²+ se estandarizó un método directo de precipitación de metales pesados en donde el fosfato es el producto de hidrólisis catalizada del ATP. Este método utiliza un medio de incubación que contiene todos los elementos necesarios para que la enzima pueda desarrollar su actividad de ATPasa. El producto de reacción de esta actividad se comprobó por la formación de un precipitado electrodenso que se deposita a lo largo de la superficie de membranas tanto de eritrocitos normales como de los invadidos. Para determinar la actividad de ATPasa en la célula completa mediante este método citoquímico, fué necesario modificar la concentración intracelular de calcio y permeabilizar dicha célula invadida. La actividad de ATPasa fué caracterizada mediante el uso de inhibidores como vanadato, ouabaína y EGTA demostrándose una actividad específica para ATPasa de Ca²+. La especificidad de ésta fué ratificada mediante el uso de inhibidores de calmodulina como trifluoperazina, W7, calmidazolium y un sustituyente de calcio como Lantano. Durante el ciclo asexual eritrocítico, la actividad en la membrana del eritrocito permaneció constante duratnte todo el ciclo y la membrana de la vacuola parasitófora mostró una mayor actividad en parásitos de 18-20 horas de crecimiento y posteriormente una disminución y pérdida de actividad durante la maduración del parásito. Se encontró actividad de ATPasa de Ca²+ en otras estructuras membranales como los clefts distribuídos en el citosol de la célula roja invadida