Evaluación del Bioensayo de MTT para determinar la proliferación in vitro de linfocitos de bovino frescos y congelados / Evaluation of the MTT bioassay to determine in vitro proliferation of fresh and frozen bovine lymphocytes

RESUMEN

Se llevaron a cabo cuatro experimentos para evaluar la proliferación in vitro (expresada como índice de estimulación, IE) de linfocitos de bovino, frescos y congelados, a concanavalina A (Con A) o antígeno de Anaplasma marginale, usando el bioensayo de MTT. En el primero, el IE de linfocitos de tres bovinos adultos en respuesta a Con A fue determinado durante seis semanas consecutivas usando el ensayo de MTT que mostró resultados reproducibles; el IE osciló entre 1.7 y 3.8. En el segundo, los linfocitos de dos bovinos adultos fueron congelados a -70§C durante seis semanas y su viabilidad fue evaluada semanalmente. La viabilidad promedio cambió de 99.5 por ciento (semana 0) a 89 por ciento en la semana cinco y disminuyó a 59 por ciento en la semana seis. En el tercero, el IE de linfocitos, frescos y congelados (tres semanas) de tres animales adultos, en respuesta a Con A, fue determinado usando el bioensayo de MTT; el IE promedio fue de 2 y de 1.5 para los linfocitos frescos y congelados, respectivamente. En el cuarto, la proliferación de linfocitos de un animal adulto recuperado de la infección con A. marginale y los de otro bovino adulto no infectado fueron probados contra un antígeno de A. marginale y determinada por medio de las pruebas de MTT y de incorporación de timidina-H3. El IE obtenido fue similar, 1.7 para MTT y 1.5 para Timidina-H3. Los resultados sugieren que el bioensayo de MTT y células congeladas pueden utilizarse como alternativas en la prueba de proliferación de linfocitos de bovino in vitro.