Estudo da interação de proteínas dos sistema calicreína-cininas com glicosaminoglicanos / Study of the interaction of Kallikrein-Kinin system proteins with glycosaminoglycans

RESUMO

A calicreína plasmática humana (huPK) é uma serinoendopeptidas envolvida em muitos processos biológicos, entre eles o sistema calicreína-cinina. Em relação a esse sistema, tem sido mostrado que a procalicreína (PK), quando ligada à membrana de células endoteliais por meio do HK, é ativada à calicreína, resultando na liberação de bradicinina (BK), um potente mediador da resposta inflamatória. A liberação de BK pode ser influenciada por muitos compostos e objetivo desse trabalho foi investigar o efeito de glicosaminoglicanos na hidrólise do HK pela huPK in vitro, na conformação do HK e da huPK, na ligação do HK da PK à superfície e matriz extracelular de células endoteliais e em um modelo c inflamação in vivo. Para isso, huPK foi incubada com HK, na ausência e presença de diferentes glicosaminoglicanos. A liberação de BK, em diferentes tempos, foi medida por radioimunoensaio e as constantes catalíticas foram calculadas. Dermatam sulfato de atum e bovino reduziram a eficiência catalítica da huPK sobre o HK (controle = 4.1 x 104 M-¹ s-¹) em 80 por cento e 68 por cento, respectivamente. Então, o efeito do dermatam sulfato bovino (DSb) na resposta inflamatória foi estudado num modelo de edema de pata de rato induzido por carragenina. O volume da pata do rato foi medido com o auxílio de um pletismômetro, de 1 a 4 horas após administração da carragenina. O DSb reduziu significativamente (p< 0.05) a resposta inflamatória na primeira e segunda hora de medida, em 24 por cento e 28 por cento, respectivamente. A interação da huPK com um glicosaminoglicano foi verificada por cromatografia de afinidade em Heparina-Sepharose. A huPK apresentou uma alta afinidade pela heparina, já que foi eluída da coluna com NaCl 0,5 M. A influência dos glicosaminoglicanos na estrutura secundária da huPK e do HK foi analisada por dicroísmo circular. Apenas os condroitim 4- e 6-sulfato modificaram essas estruturas...