Expressão das proteínas galectinas-1, -3 e anexina 1 em células inflamatórias: estudo em modelos in vivo e in vitro de inflamação aguda / Expression of galectin-1, -3 and annexin 1 in imflammatory cells: a study of in vivo and in vitro modesls of acute inflammation

RESUMO

Objetivos: Investigar o efeito do tratamento farmacológico das proteínas (Gal-1) e -3 (Gal-3) no recrutamento dos leucócitos durante a reação i aguda, e a expressão das galectinas e da anexina 1 (ANXA1) nas células inflamatórias utilizando uma combinação de modelos experimentais in vivo e in vitro. Métodos: No estudo in vivo, ratos Sprague-Dawley foram tratados pela injeção intravenos ou Gal-3 (3 μg/kg), seguida da aplicação de carragenina (1,5 mg/kg) e da lavados peritoniais, para as análises quantitativa e de Western blotting. Para indução da peritonite experimental, os animais receberam injeção intraperitonial de carragenina e foram sacrificados após 0, 4, 24 e 48 horas. No modelo in vitro, os neutrófilos humanos de voluntários sadios e as células endoteliais da linhagem Ea.hy926 foram utilizados no ensaio de transmigração induzido pela IL-8. Na análise imunocitoquímica, fragmentos do mesentério e amostras de sangue dos ratos, obtidos após peritonite experimental, foram processados e a expressão das Gal-1 e -3, monitoradas pelos anticorpos policlonais de coelho anti-Gal-1 e -3. Nos neutrófilos humanos e nas células endoteliais, a expressão da ANXA1 foi investigada pelos anticorpos policlonais de cabra anti-ANXA1 LCS3 (reconhecedor das isoformas intacta e clivada da proteína ANXA1) e LCPS1 (específico para a região N-terminal da proteína intacta),bem como pela anti-Gal-1 e -3. Resultados: No modelo in vivo de inflamação, após 4 horas da resposta inflamatória, observamos no mesentério mastócitos desgranulados e intensa migração leucocitária e, ao término de 24 e 48 horas, aumento do número de macrófagos. O tratamento dos animais com a Gal-1 diminuiu (~50 por cento) o recrutamento dos leucócitos para a cavidade peritonial após 4 horas, enquanto o tratamento com o anticorpo rabbit anti-Gal-1, depois de 48 horas, aumentou o número de leucócitos na cavidade. Neste mesmo período, a expressão da Gal-3 foi detectada no lavado peritonial pela análise de Western blotting. A análise imunocitoquímica demonstrou que, na fase inicial da inflamação do mesentério, a expressão das proteínas Gal-3 e -1 diminuiu nos mastócitos e neutrófilos transmigrados, respectivamente, ao passo que nas fases tardias, uma alta imunorreatividade da Gal-3 foi observada nos mastócitos e macrófagos e da Gal-1 nos neutrófilos transmigrados e também nos macrófagos. No modelo in vitro de transmigração celular, a interação neutrófilo-endotélio produziu um aumento da ANXA1 clivada em todos os compartimentos intracelulares dos neutrófilos aderidos, principalmente na membrana plasmática, detectada pela quantificação da imunorreatividade dos anticorpos LCS3 e LCPS1. Nestas células, observamos ainda um aumento na expressão da Gal-3, enquanto a imunorreatividade da Gal-1 diminuiu (~50 por cento) nos neutrófilos transmigrados em relação às células que não migraram. As células endoteliais, após a transmigração dos neutrófilods, apresentaram altos níveis na membrana plasmática das proteínas ANXA1(detectada pelo anticorpo LCS3) e Gal-3. Conclusões: As alterações nas concentrações e localizações das proteínas investigadas nas células inflamatórias, tanto no modelo in vivo como in vitro, sugerem um mecanismo de equilíbrio intracelular dos seus papéis pró(Gal-3) e antiinflamatório (Gal-1 e ANXA1) para a homeostase da resposta inflamatória aguda.