Papel dos (glico)esfingolipídeos e proteofosfoglicanos de Leishmania (Leishmania) amazonensis na infecção de macrófagos: caracterização de novos antígenos e isolamento de microdomínios de membranas resistentes a detergente não-iônico / Role of (glyco)sphingolipids and proteophosphoglycans of Leishmania (Leishmania) amazonensis on macrophage infection: characterization of novel antigens and isolation of non-ionic detergent-resistant membrane microdomains

RESUMO

As leishmanioses constituem um importante problema de saúde pública no Brasil, em razão da incidência da doença associada à alta taxa de morbidade. Devido ao fato da Leishmania ser parasita intracelular no hospedeiro vertebrado, estudos de moléculas do parasita, que atuam na interação do parasita com a célula do hospedeiro vertebrado, são de alta importância para melhor compreensão dos para mecanismos de invasão e sobrevivência do parasita. Seguindo este racional, nesta tese foram identificados, purificadores e caracterizados proteofosfoglicanos secretados por formas promastigotas (pPPG) de L. (L. ) amazonensis, respectivamente de meios de cultura e de macrófagos infectados com esses parasitas. A purificação dos PPGs foi realizada por combinações de cromatografias em DEAE-Sephadex, Octyl-Sepharose e Bio-Gel A-0.5 e ultracentrifugações. Por Western blotting em fase sólida utilizando diferentes anticorpos monoclonais (mAbs), observou-se que opPPG apresenta alto peso molecular, contem cadeias fosfoglicanas e é reconhecido por mAbs anti-glicoesfingolipídeos (GSLs) ST-3 e St-5, e mAb anti-lipofosfoglicano (LPG) VST-1. Em estudos imunohistoquímicos de cortes de lesão de hamsters infectados com L. (L. ) amazonensis, observou-se a presença de material reativo mAbs ST-3, ST-4 e ST-5 superfície do parasita e em torno do vacúolo parasitóforo. Após delipidação de cortes da (processo em que extraídos os glicolipídeos), a reatividade com os mAbs limitou-se a algumas regiões do vacúolo, sugerindo a possível localização dos aPPGs na célula infectada. O aPPG apresentou padrão de migração eletroforética similar ao pPPG, e foi reconhecido pelos mAbs ST-3, ST-4 e ST-5, mas...