Inmunolocalización subcelular de antígeno tumoral mayor, proteína p53 y antígeno nuclear de proliferación celular en células transformadas por el virus SV40 / Subcellar immunolocalization of SV40-large T antigen, p53 and proliferating cell nuclear antigen in SV40-virus transformed cells

RESUMEN

La localización intracelular de proteínas involucradas en el control proliferativo puede ser estudiada mediante técnicas de inmunocitoquímica. Con el propósito de establecer la distribución del antígeno tumoral mayor del virus SV40 (agT), proteína p53 (p53) y antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) tanto en el núcleo como en la superficie de células transformadas por el virus SV40 provenientes de una línea de cultivo, se utilizaron técnicas de inmunoperoxidasa tanto a nivel de microscopia de luz y electrónica como técnicas de inmunofluorescencia. Para lograr la optimización de dichas técnicas en nuestro material se evaluaron distintos procedimientos de fijación, dos métodos de permeabilización celular y se efectuaron modificaciones a las técnicas de inmunoperoxidasa e inmunofluorescencia. Los resultados mostraron inmonorreactividad nuclear conservada para los tres antígenos estudiados cuando se utilizaron fijadores alcohólicos. La fijación con aldehídos permitió una buena morfología y óptima inmunorreactividad a nivel de microscopia de luz, pero las células debieron ser sometidas a un tratamiento previo de permeabilización. A nivel de microscopia electrónica se observó pobre morfología con fijadores alcohólicos, la que mejoró notablemente utilizando fijadores a base de aldehídos. Cuando se utilizó glutaraldehídos como fijador no hubo conservación de la inmunorreactividad. El agT de superficie fue demostrado con una técnica de inmunoperoxidasa modificada para ser aplicada a células sin fijar mantenidas en suspensión.