Efeito do metil éster de L-leucina sobre a proliferação e a ultra-estrutura do Trypanosoma cruzi / Effect of L-leucine methyl ester on the proliferation and the ultrastructure of the Trypanosoma cruzi

RESUMO

Metil ésteres de L-aminoácidos,tais como o metil éster de L-leucina(Leu-OMe),foram identificados como agentes hidrolíticos do sistema lisosomal de amastigotas do tripanosomatídeo Leishmania(Leishmania)amazonensis,por um mecanismo que envolve a hidrólise do éster por enzimas do parasita localizadas no interior dos megasomos.Assim, nosso estudo teve por objetivo analisar o efeito de Leu-OMe sobre as 3 formas evolutivas do tripanosomatídeo Trypanosoma cruzi,em busca de potenciais alvos do composto neste protozoário.O tratamento de formas epimastigotas resultou em inibição do crescimento de maneira dose-dependente,com IC50/1dia=0,55±0,21 mM,sendo que incubação com 4-8 mM/1dia levou a 100por cento de morte celular.O tratamento de formas tripomastigotas sangüíneos resultou em lise celular,com um IC50/1dia = 1,46±,016 mM.Macrófagos infectados e tratados com 0,125 a 1 mM Leu-OMe apresentaram um decréscimo dose-e tempo-dependente na porcentagem de infecção de células hospedeiras por formas amastigotas.Alterações morfológicas nos macrófagos foram observadas apenas em concentrações acima de 8 mM,e a partir do 3ºdia de tratamento.Análise por microscopia eletrônica de transmissão de parasitos tratados demonstrou diversas alterações morfológicas na forma do corpo,mitocôndria e núcleo,enquanto que cinetoplasto e reservosomos (compartimento pré-lisosomal)não foram muito afetados.A lise das formas tripomastigotas sangüíneos e amastigotas intracelulares sugeriu que os lisosomos de T.cruzi são o principal alvo da droga,uma vez que reservosomos são encontrados apenas em formas epimastigotas.Nossos resultados demonstraram,pelo uso da citoquímica ultra-estrutural para aril sulfatase,a presença de lisosomos em epimastigotas de T.cruzi,assim como confirmaram sua susceptibilidade ao Leu-OMe,levando à morte dos parasitas.Esta técnica citoquímica foi usada pela 1ªvez nos protozoários tripanosomatídeos T.cruzi e Crithidia fasciculata,detectando reação positiva exclusivamente em vacúolos...