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Aplicação de princípios de engenharia tecidual no estudo da diferenciação de células-tronco pulpares / The effect of dentin pre-treatment and dentin-derived BMPs on SHED differentiation
Porto Alegre; s.n; 2008. 61 p. ilus.
Tese em Português | LILACS, BBO - Odontologia | ID: lil-509987
Biblioteca responsável: BR541.1
Localização: BR541.1; T616.314-053.2, C334a, 2008
RESUMO
O presente estudo utilizou o modelo fatia-dental/matriz-polimérica para avaliar a influência do tratamento dentinário e das BMPs dentinárias na diferenciação das células-tronco da polpa de dentes decíduos (SHED). Secções transversais (1mm) foram preparadas a partir de terceiros molares humanos extraídos. Matrizes poliméricas a base de ácido poli-L-Iático (PLLA) foram criadas no interior da cavidade pulpar das secções dentinárias, tratadas com solução de EDTA a 10%; NaOCI a 5.25%; ou permanecendo sem tratamento. Matrizes poliméricas confeccionadas sem as fatias dentais foram utilizadas como controle. As células (5x10 na quarta potência) foram semeadas nas matrizes e, após 7, 14, 21 e 28 dias de cultura in vitro, a expressão de marcadores de diferenciação odontoblástica (DSPP, DMP1 e MEPE) e a proliferação celular (WST-1) foram avaliadas. Células (5x10 na quinta potência) semeadas nas matrizes foram transplantadas em camundongos imunodeficientes e cultivadas in vivo por um período de 14 e 28 dias. Para avaliar a atividade das BMPs dentinárias, 5x10 na quarta potência, células foram semeadas em matrizes poliméricas com fatia dental e cultivadas na presença de anticorpos anti-BMP-2, -4, ou -7 (2 µg/ml) durante 14 dias. Adicionalmente, 5x10 na quinta potência, células foram tratadas com rhBMP-2, -4, ou -7 (100ng/mL) por 24hs. As células cultivadas in vitro e in vivo alteraram sua expressão genética durante o curso do tempo. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células cultivadas in vitro após 14 dias (tratamento com EDTA e dentina sem tratamento) e in vivo após 28 dias (EDTA), não sendo detectados nos grupos NaDCI e nas células cultivadas nas matrizes sem fatia dental. A proliferação foi reduzida com a diferenciação celular (p<0.05). A utilização de BMP-2/4Ab no meio de cultura exerceu um efeito inibitório na expressão dos marcadores de diferenciação celular, não ocorrendo quando do cultivo das SHED na presença de BMP-7Ab. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por...
ABSTRACT
The effect of dentin pre-treatments and dentin-derived BMPs on SHED differentiation was tested using the Tooth-Slice Scaffold model (TSS). Dentin slices (1mm thickness) were prepared from extracted human third molars. Biodegradable PLLA scaffolds were prepared inside the pulp chamber of the tooth-slices, treated alternatively with a 5.25% NaOCI or 10% EDTA solution, or remaining untreated (WO-T). PLLA sponge scaffolds with no tooth-slice(PSS) were used as control. SHED(5x10 to th fourth power) were seeded in TSS and PSS and after 7,14,21 and 28 days in culture, RT-PCR (DSPP, DMP1 and MEPE) and WST-1 proliferation assay were performed. Additionally, cells (5x10 to the fifith power) were seeded inTSS and PSS and transplanted into SCID mice (14 and 28 days). To verify the dentin-derived BMPs bioactivity, SHED (5x10 to the fourth power) were cultured in TSS in the presence of anti-human BMP-2,-4, and -7 antibodies for 14 days. Besides, cells in culture were treated with rhBMP-2; -4; or -7 for 24 hours. After in vitro and in vivo time course, SHED altered their genetic expression. The cells cultured in vitro in the TSS (EDTA or WO-T) expressed the differentiation markers after 14 days and maintained expression thereafter. Cell proliferation rate was reduced following the differentiation (p<0.05). Cells transplanted in vivo expressed DSPP, DMP-1 and MEPE after 28 days (EDTA). No transcripts were found in tooth-slices treated with NaOCI or in PSS groups. BMP-2/4Ab prevented the differentiation process and no inhibitory effect was detected for BMP-7Ab. After 24 hours, expression of DSPP, DMP-1 and MEPE was found for rhBMP-2, and DSPP and DMP-1 for rhBMP-4 and rhBMP-7 treated SHED, but not for untreated cells. The tooth slice scaffold model suggests that dentin can provide the environment for SHED differentiation and dentin-derived morphogenic signals BMP-2 and BMP-4 play an important role in this process.
Assuntos
Texto completo: Disponível Coleções: Bases de dados internacionais Base de dados: BBO - Odontologia / LILACS Assunto principal: Células-Tronco / Diferenciação Celular / Engenharia Tecidual / Polpa Dentária / Dentina / Proliferação de Células Tipo de estudo: Estudo de avaliação Limite: Humanos Idioma: Português Ano de publicação: 2008 Tipo de documento: Tese
Texto completo: Disponível Coleções: Bases de dados internacionais Base de dados: BBO - Odontologia / LILACS Assunto principal: Células-Tronco / Diferenciação Celular / Engenharia Tecidual / Polpa Dentária / Dentina / Proliferação de Células Tipo de estudo: Estudo de avaliação Limite: Humanos Idioma: Português Ano de publicação: 2008 Tipo de documento: Tese
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