Estudo da participação de FAK/SRC no processo de invasão do Trypanosoma cruzi e o efeito da infecção na distribuição e expressão de proteínas estruturais de adesão em cardimiócitos / Study of participation of Fak/SRC in the invasion of Trypanosoma cruzi infection and the effect of the distribution and expression of structural proteins of membership in cardiomyocytes

RESUMO

O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da Doença de Chagas, um importante problema de saúde pública na América do Sul e Central. Os parasitas são capazes de ativar vias de sinalização durante o processo de invasão na célula hospedeira, incluindo ativação de proteínas tirosinas cinases que podem ser importantes na regulação da entrada do parasita. Neste trabalho, demonstramos a participação de proteínas tirosinas cinases, especialmente cinase, e PP1, um potente inibidor das proteínas da família-Src, reduziu significativamente de maneira dose-dependente a invasão do T. cruzi. Além disso, a entrada do T. cruzi foi acompanhada por mudanças na expressão de c-Src e níveis de fosforilação de FAK. O aumento da ativação de FAK ocorreu durante estágio inicial da interação T. cruzi cardiomiócito (30 e 60 min) com concomitante aumento (2X) nos níveis de expressão de c-Src. Defosforilação de FAK também coincidiu com níveis reduzidos da expressão de c-Src após 2h de interação, sugerindo que FAK/c-Src promova uma sinalização integrada que coordena a entrada do parasita. Esses dados fornecem novas informações sobre as vias de sinalização envolvidas na invasão do T. cruzi em cardiomiócitos. Outra abordagem deste estudo foi avaliar o efeito da infecção do T. cruzi sobre proteínas de adesão focal e junções aderentes, uma vez que mudanças estruturais, incluindo quebra de miofibrilas e desorganização de costâmeros de vinculina (Pereira et al., 1993; Melo et al., 2004), além da regulação negativa de mRNA de alfa-actina cardíaca, foram evidenciados em cardiomiócitos infectados pelo T. cruzi (Pereira et al., 2000). Neste estudo, investigamos a distribuição espacial e expressão de proteínas de adesão focal e junções aderentes durante infecção pelo T. cruzi. A localização de alfa-actinina, talina e paxilina permaneceu inalterada em cardiomiócitos infectados após 24h. Em contraste, o padrão estriado de alfa-actinina e talina foi abolido em tempos tardios da infecção (72h). A marcação de paxilina em contatos focais também foi reduzida em células altamente infectadas. Além dos distúrbios na distribuição espacial, a infecção pelo T. cruzi também afetou a expressão das proteínas de adesão focal. Ensaios bioquímicos demonstraram declínio de 32 por cento em ambas alfa-actinina e talina, e também redução de 34,5 por cento na expressão de paxilina após 72h de infecção. Ainda, a infecção resultou em desorganização de junções aderentes com regulação negativa da expressão de caderina e catenina. Nossos dados demonstram que a infecção pelo T. cruzi altera a integridade estrutural de cardiomiócitos in vitro, que pode resultar em perda da tensão cardíaca, sugerindo que mudanças estruturais possam contribuir para as dinfunções cardíacas evidenciadas na doença de Chagas.