Obtenção de um pseudotipo repórter do vírus do oeste do Nilo baseado em vetor lentiviral / Obtaining a pseudotype reporter for West Nile virus-based lentiviral vector

RESUMO

O Vírus do Oeste do Nilo (WNV) é um flavivírus que se mantém na natureza em ciclos alternados de infecção entre aves silvestres e mosquitos hematófagos, principalmente do gênero Culex. Ocasionalmente, o vírus pode ser transmitido aos mamíferos por mosquitos que se alimentaram previamente de aves viremicas. Humanos e equinos são altamente suscetíveis a infecção pelo WNV, e frequentemente desenvolvem febre, que pode ser seguida por infecção do sistema nervoso central e meningoencefalite, podendo ser fatal. Já houve registros do vírus na África, Oriente Médio e Ásia desde 1937. Foi detectado em Nova York em 1999 e se disseminou rapidamente pelos Estados Unidos e mais tarde para o Canadá. A rápida disseminação da infecção em direção ao sul sugere que novas evidências sorológicas e virológicas serão relatadas nos próximos anos na América Central e do Sul. No ano passado, evidências sorológicas do virus foram registradas em equinos na região do Pantanal do Brasil. Este trabalho teve como objetivo desenvolver um pseudotipo repórter para o WNV com base em um vetor retroviral a ser utilizado em testes de neutralização. Para tanto, foi desenvolvido um plasmídeo recombinante capaz de expressar as glicoproteínas do envelope do WNV. Este plasmídeo foi co-transfectado em células eucarióticas junto a outros dois plasmídeos (pHP e pTY-GFP), o que permitiu a formação das partículas. Estas possuem o capsídeo e o genoma defectivo do vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 (HIV-1), um gene repórter gfp (green fluorescente protein) e as glicoproteínas do envelope do WNV. Nossos resultados mostraram que as glicoproteínas do envelope do WNV foram expressas, e que as partículas pseudotipo foram formadas. Essas partículas poderão ser uma ferramenta molecular muito eficiente para estudos morfofuncionais das glicoproteínas do envelope, tais como, tropismo, mecanismos de entrada (inibidores e facilitadores). Uma melhor compreensão destes mecanismos é essencial para o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico, profilaxia e tratamento.