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Single-molecule analysis of DNA replication in Xenopus egg extracts.
Yardimci, Hasan; Loveland, Anna B; van Oijen, Antoine M; Walter, Johannes C.
Afiliação
  • Yardimci H; Department of Biological Chemistry and Molecular Pharmacology, Harvard Medical School, Boston, MA, USA.
Methods ; 57(2): 179-86, 2012 Jun.
Article em En | MEDLINE | ID: mdl-22503776
ABSTRACT
The recent advent in single-molecule imaging and manipulation methods has made a significant impact on the understanding of molecular mechanisms underlying many essential cellular processes. Single-molecule techniques such as electron microscopy and DNA fiber assays have been employed to study the duplication of genome in eukaryotes. Here, we describe a single-molecule assay that allows replication of DNA attached to the functionalized surface of a microfluidic flow cell in a soluble Xenopus leavis egg extract replication system and subsequent visualization of replication products via fluorescence microscopy. We also explain a method for detection of replication proteins, through fluorescently labeled antibodies, on partially replicated DNA immobilized at both ends to the surface.
Assuntos

Texto completo: 1 Coleções: 01-internacional Base de dados: MEDLINE Assunto principal: Oócitos / DNA Viral / Extratos Celulares / Replicação do DNA / Ácidos Nucleicos Imobilizados Limite: Animals Idioma: En Revista: Methods Assunto da revista: BIOQUIMICA Ano de publicação: 2012 Tipo de documento: Article País de afiliação: Estados Unidos País de publicação: EEUU / ESTADOS UNIDOS / ESTADOS UNIDOS DA AMERICA / EUA / UNITED STATES / UNITED STATES OF AMERICA / US / USA

Texto completo: 1 Coleções: 01-internacional Base de dados: MEDLINE Assunto principal: Oócitos / DNA Viral / Extratos Celulares / Replicação do DNA / Ácidos Nucleicos Imobilizados Limite: Animals Idioma: En Revista: Methods Assunto da revista: BIOQUIMICA Ano de publicação: 2012 Tipo de documento: Article País de afiliação: Estados Unidos País de publicação: EEUU / ESTADOS UNIDOS / ESTADOS UNIDOS DA AMERICA / EUA / UNITED STATES / UNITED STATES OF AMERICA / US / USA