SUPLEMENTAÇÃO DO MEIO DE CONGELAÇÃO SEMINAL DE Prochilodus brevis COM POLISSACARÍDEOS SULFATADOS EXTRAÍDOS DE PELE DE TILÁPIA E DE ALGAS MARINHAS

RESUMO

Prochilodus brevis, ou curimatã comum, é um peixe reofílico que encontra-se com sua sobrevivência ameaçada por ações antrópicas. Assim, esforços pela preservação da espécie têm sido tomados, o que tornou necessário aprimorar as biotécnicas reprodutivas, como a criopreservação seminal, com potenciais agentes antioxidantes. Diante disso, o estudo objetivou elaborar um protocolo de criopreservação seminal de P. brevis suplementando o meio de congelação com polissacarídeos sulfatados (PS), extraídos de algas marinhas (Gracilaria domingensis ou Ulva fasciata) ou pele de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). Para isso, no experimento 1, verificou-se o potencial antioxidante in vitro (análises de DPPH, capacidade quelante do ferro e capacidade antioxidante total) das glicosaminoglicanos (GAG) da pele de O. niloticus e sua suplementação, em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 ou 5,0 mg/mL), no meio de congelação seminal (Glicose + dimetilsufóxido - DMSO). No experimento 2, o sêmen foi diluído no meio de congelação (Glicose + DMSO) suplementado com diferentes concentrações (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 e 3.0 mg/mL) de PS de duas algas marinhas (G. domingensis ou U. fasciata). Em ambos os experimentos, um tratamento não suplementado foi utilizado como controle, as amostras foram criopreservadas e, após um período, analisadas cinética (motilidade total; motilidade progressiva; velocidade curvilinear [VCL], velocidade em linha reta [VSL], velocidade média de deslocamento [VAP], linearidade [LIN] e oscilação [WOB]), morfologia, integridade de membrana plasmática (IMP) e de DNA espermáticos (IDE) e potencial de membrana mitocondrial (PMM experimento 2). No experimento 1, foi verificado que os GAG nas maiores concentrações apresentam maior ação antioxidante in vitro, especialmente na atividade quelante do ferro, contudo o aumento das concentrações dos GAG diminuiu os parâmetros cinéticos, porém a concentração de 0,5 mg mL-1 apresentou resultados semelhantes ao controle. Para os parâmetros de morfologia, IMP e IDE, não houve diminuição dos resultados com o aumento das concentrações das GAG. No experimento 2, não houve interação entre as algas e as concentrações. As algas testadas, independentemente da concentração, não diferiram entre si. Ao comparar as concentrações, independentemente da alga, 1,0 mg/mL de PS apresentou melhores resultados para VCL e VSL. Para VAP e WOB, 1,0 mg/mL de PS apresentou melhores resultados, mas diferiu estatisticamente apenas de 3,0 mg/mL. LIN seguiu o mesmo padrão, mas diferiu estatisticamente das concentrações de 2,5 e 3,0 mg/mL de PS. Para motilidade progressiva, 1,0 mg/mL de G. domingensis apresentou resultados superiores em relação ao controle. Para PMM, G. domingensis foi superior a U. fasciata, independentemente da concentração. As menores concentrações (0,5 e 1,0 mg/mL) apresentaram os melhores resultados, independentemente da alga. No entanto, para PMM, o controle foi superior a todos os tratamentos testados. Dessa forma, conclui-se que os GAG, extraídos da pele de O. niloticus, possuem ação antioxidantes in vitro e as menores concentrações (0,5 mg/mL) de GAG e PS de G. domingensis são um suplemento em potencial para o meio de congelação de P. brevis.

ABSTRACT

Prochilodus brevis, or Brazilian bocachico, is a rheophilic fish that meets its threats through anthropic actions. Thus, efforts to preserve the species have been taken, which made it necessary to improve reproductive biotechniques, such as seminal cryopreservation, with potential antioxidant agents. Therefore, the study aimed to develop a protocol for seminal cryopreservation of P. brevis supplementing the freezing medium with sulfated polysaccharides (PS), extracted from seaweed (Gracilaria domingensis or Ulva fasciata) or Nile tilapia skin (Oreochromis niloticus). For this, in experiment 1, the in vitro antioxidant potential (DPPH analysis, iron chelating capacity and total antioxidant capacity) of the O. niloticus skin glycosaminoglycans (GAG) and their supplementation at different concentrations (0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5; 3.0; 3.5; 4.0; 4.5 or 5.0 mg/mL), in the seminal freezing medium (Glucose + dimethyl sufoxide - DMSO). In experiment 2, semen was diluted in freezing medium (Glucose + DMSO) supplemented with different concentrations (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0 mg/mL) of PS from two marine algae (G. domingensis or U. fasciata). In both experiments, an unsupplemented treatment was used as a control, the samples were cryopreserved and, after a period, analyzed kinetics (total motility; Progressive motility; curvilinear velocity [VCL], straight line velocity [VSL], mean velocity of the path [VAP], linearity [LIN] and wobble [WOB]), morphology, plasma membrane integrity (IMP) and sperm DNA (IDE) and mitochondrial membrane potential (PMM experiment 2). In experiment 1, it was verified that GAGs at higher concentrations have greater antioxidant action in vitro, especially in the chelating activity of iron, however the increase in GAG concentrations decreased the kinetic parameters, but the concentration of 0.5 mg mL-1 presented results similar to the control. For the parameters of morphology, IMP and IDE, there was no decrease in results with increasing concentrations of GAG. In experiment 2, there was no interaction between algae and concentrations. The algae tested, regardless of concentration, did not differ from each other. When comparing the concentrations, regardless of the alga, 1.0 mg/mL of PS showed better results for VCL and VSL. For VAP and WOB, 1.0 mg/mL of PS showed better results, but statistically differed only from 3.0 mg/mL. LIN followed the same pattern, but differed statistically from the concentrations of 2.5 and 3.0 mg/mL of PS. For progressive motility, 1.0 mg/mL of G. domingensis showed superior results compared to the control. For PMM, G. domingensis was superior to U. fasciata, regardless of concentration. The lowest concentrations (0.5 and 1.0 mg/mL) showed the best results, regardless of the alga. However, for PMM, the control was superior to all tested treatments. Thus, it is concluded that the GAG, extracted from the skin of O. niloticus, have antioxidant action in vitro and the lowest concentrations (0.5 mg/mL) of GAG and PS of G. domingensis are a potential supplement for the freezing medium of P. brevis.