RESUMO
Historicamente, o sarampo está associado a altas taxas de morbidade e mortalidade e, apesar dos programas de imunização utilizados na maioria dos países, ainda continuam a ocorrer surtos da doença.O número de casos relatados de sarampo vem diminuindo desde a introdução da primeira vacina em 1960, porém a OMS prevê que ainda ocorram 700.000 mortes anuais em países em desenvolvimento.A cepa vacinal CAM-70 tem origem japonesa, foi utilizada em crianças brasileiras e produzida por Biomanguinhos entre 1982 e 2003. Estudos anteriores caracterizaram esta vacina, mas apenas os genes F,H e N foram seqüenciados.A necessidade de conhecer melhor a cepa vacinal CAM-70, produzida por BIOManguinhos/FIOCRUZ nos levou a propor o seqüenciamento do gene que codifica a proteína P e uma análise comparativa da seqüência desse gene com o mesmo gene de outras cepas vacinais. Além disso, propomos a expressão heteróloga em células de inseto (Sf9) das proteínas P e V, codificadas pelo gene P, e da proteína N para estudos posteriores de suas funções na regulação da transcrição e/ou na resposta imune à infecção. Em relação à expressão da proteína da N a possibilidade de produção da mesma como antígeno para o diagnóstico do sarampo. Nesse contexto o ARN viral foi extraído de células VERO infectadas com o vírus e o ADN complementar (ADNc) obtido por reação da transcriptase reversa. O ADNc foi amplificado por PCR utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos. Os genes foram clonados em um vetor doador para recombinação homóloga usando o sistema Bac-to-Bac (Invitrogen) ou o vetor pCR2.1 para seqüenciamento. Foram utilizados o bacmídios recombinantes para expressão das proteínas em células de inseto. A seqüência obtida foi analisada comparativamente com outras seqüências de cepas vacinais ou selvagens.O gene P da cepa vacinal CAM-70 foi o masis divergente entre os membros do genótipoA. A amplificação e clonagem dos genes P,V e N no vetor de transferência foi realizada com seucesso.A expressão das proteínas recombinantes em células Sf9 foi detectada por SDS-PAGE e analisada por Western-blot(AU)