T Cell Receptor Is Required for Differentiation, but Not Maintenance, of Intestinal CD4+ Intraepithelial Lymphocytes.

The gut epithelium is populated by intraepithelial lymphocytes (IELs), a heterogeneous T cell population with cytotoxic and regulatory properties, which can be acquired at the epithelial layer. However, the role of T cell receptor (TCR) in this process remains unclear. Single-cell transcriptomic analyses revealed distinct clonal expansions between cell states, with CD4+CD8αα+ IELs being one of the least diverse populations. Conditional deletion of TCR on differentiating CD4+ T cells or of major histocompatibility complex (MHC) class II on intestinal epithelial cells prevented CD4+CD8αα+ IEL differentiation. However, TCR ablation on differentiated CD4+CD8αα+ IELs or long-term cognate antigen withdraw did not affect their maintenance. TCR re-engagement of antigen-specific CD4+CD8αα+ IELs by Listeria monocytogenes did not alter their state but correlated with reduced bacterial invasion. Thus, local antigen recognition is an essential signal for differentiation of CD4+ T cells at the epithelium, yet differentiated IELs are able to preserve an effector program in the absence of TCR signaling.

Quantitative trait loci mapping provides insights into the genetic regulation of dendritic cell numbers in mouse tissues.

To explore the influence of genetics on homeostatic regulation of dendritic cell (DC) numbers, we present a screen of DCs and their progenitors in lymphoid and non-lymphoid tissues in Collaborative Cross (CC) and Diversity Outbred (DO) mice. We report 30 and 71 loci with logarithm of the odds (LOD) scores >8.18 and ranging from 6.67 to 8.19, respectively. The analysis reveals the highly polygenic and pleiotropic architecture of this complex trait, including many of the previously identified genetic regulators of DC development and maturation. Two SNPs in genes potentially underlying variation in DC homeostasis, a splice variant in Gramd4 (rs235532740) and a missense variant in Orai3 (rs216659754), are confirmed by gene editing using CRISPR-Cas9. Gramd4 is a central regulator of DC homeostasis that impacts the entire DC lineage, and Orai3 regulates cDC2 numbers in tissues. Overall, the data reveal a large number of candidate genes regulating DC homeostasis in vivo.

TCR-Vγδ usage distinguishes protumor from antitumor intestinal γδ T cell subsets.

γδ T cells represent a substantial fraction of intestinal lymphocytes at homeostasis, but they also constitute a major lymphocyte population infiltrating colorectal cancers (CRCs); however, their temporal contribution to CRC development or progression remains unclear. Using human CRC samples and murine CRC models, we found that most γδ T cells in premalignant or nontumor colons exhibit cytotoxic markers, whereas tumor-infiltrating γδ T cells express a protumorigenic profile. These contrasting T cell profiles were associated with distinct T cell receptor (TCR)-Vγδ gene usage in both humans and mice. Longitudinal intersectional genetics and antibody-dependent strategies targeting murine γδ T cells enriched in the epithelium at steady state led to heightened tumor development, whereas targeting γδ subsets that accumulate during CRC resulted in reduced tumor growth. Our results uncover temporal pro- and antitumor roles for γδ T cell subsets.

A minimally-edited mouse model for infection with multiple SARS-CoV-2 strains.

Efficient mouse models to study SARS-CoV-2 infection are critical for the development and assessment of vaccines and therapeutic approaches to mitigate the current pandemic and prevent reemergence of COVID-19. While the first generation of mouse models allowed SARS-CoV-2 infection and pathogenesis, they relied on ectopic expression and non-physiological levels of human angiotensin-converting enzyme 2 (hACE2). Here we generated a mouse model carrying the minimal set of modifications necessary for productive infection with multiple strains of SARS-CoV-2. Substitution of only three amino acids in the otherwise native mouse Ace2 locus (Ace2 TripleMutant or Ace2™), was sufficient to render mice susceptible to both SARS-CoV-2 strains USA-WA1/2020 and B.1.1.529 (Omicron). Infected Ace2™ mice exhibited weight loss and lung damage and inflammation, similar to COVID-19 patients. Previous exposure to USA-WA1/2020 or mRNA vaccination generated memory B cells that participated in plasmablast responses during breakthrough B.1.1.529 infection. Thus, the Ace2™ mouse replicates human disease after SARS-CoV-2 infection and provides a tool to study immune responses to sequential infections in mice.

A conserved Bacteroidetes antigen induces anti-inflammatory intestinal T lymphocytes.

The microbiome contributes to the development and maturation of the immune system. In response to commensal bacteria, intestinal CD4+ T lymphocytes differentiate into functional subtypes with regulatory or effector functions. The development of small intestine intraepithelial lymphocytes that coexpress CD4 and CD8αα homodimers (CD4IELs) depends on the microbiota. However, the identity of the microbial antigens recognized by CD4+ T cells that can differentiate into CD4IELs remains unknown. We identified ß-hexosaminidase, a conserved enzyme across commensals of the Bacteroidetes phylum, as a driver of CD4IEL differentiation. In a mouse model of colitis, ß-hexosaminidase-specific lymphocytes protected against intestinal inflammation. Thus, T cells of a single specificity can recognize a variety of abundant commensals and elicit a regulatory immune response at the intestinal mucosa.

Enhancement of Th1 lung immunity induced by recombinant Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin attenuates airway allergic disease.

Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin (BCG) has been shown to down-regulate experimental allergic asthma, a finding that reinforced the hygiene hypothesis. We have previously found that recombinant BCG (rBCG) strain that express the genetically detoxified S1 subunit of pertussis toxin (rBCG-S1PT) exerts an adjuvant effect that enhances Th1 responses against BCG proteins. Here we investigated the effect of this rBCG-S1PT on the classical ovalbumin-induced mouse model of allergic lung disease. We found that rBCG-S1PT was more effective than wild-type BCG in preventing Th2-mediated allergic immune responses. The inhibition of allergic lung disease was not associated with increased concentration of suppressive cytokines or with an increased number of pulmonary regulatory T cells but was positively correlated with the increase in IFN-gamma-producing T cells and T-bet expression in the lung. In addition, an IL-12-dependent mechanism appeared to be important to the inhibition of lung allergic disease. The inhibition of allergic inflammation was found to be restricted to the lung because when allergen challenge was given by the intraperitoneal route, rBCG-S1PT administration failed to inhibit peritoneal allergic inflammation and type 2 cytokine production. Our work offers a nonclassical interpretation for the hygiene hypothesis indicating that attenuation of lung allergy by rBCG could be due to the enhancement of local lung Th1 immunity induced by rBCG-S1PT. Moreover, it highlights the possible use of rBCG strains as multipurpose immunomodulators by inducing specific immunity against microbial products while protecting against allergic asthma.

Adsorption of Toll-Like Receptor 4 Agonist to Alum-Based Tetanus Toxoid Vaccine Dampens Pro-T Helper 2 Activities and Enhances Antibody Responses.

Aluminum salts gels (alum) are TLR-independent adjuvants and have been used to boost antibody responses in alum-based vaccines such as diphtheria, pertussis, and tetanus toxoid (DPT) triple vaccine. However, the pro-Th2 activity of alum-based vaccine formulations has not been fully appreciated. Here we found that alum-based tetanus toxoid (TT) vaccine was biased toward a Th-2 profile as shown by TT-induced airway eosinophilic inflammation, type 2 cytokine production, and high levels of IgE anaphylactic antibodies. The adsorption into alum of prototypic TLR4 agonists such as lipopolysaccharides (LPS) derived from Escherichia coli consistently dampened TT-induced Th2 activities without inducing IFNγ or Th1-like responses in the lung. Conversely, adsorption of monophosphoryl lipid A (MPLA) extracted from Salmonella minnesota, which is a TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-ß- (TRIF-) biased TLR4 agonist, was less effective in decreasing Th-2 responses. Importantly, in a situation with antigenic competition (OVA plus TT), TT-specific IgG1 or IgG2a was decreased compared with TT sensitization. Notably, LPS increased the production of IgG1 and IgG2a TT-specific antibodies. In conclusion, the addition of LPS induces a more robust IgG1 and IgG2a TT-specific antibody production and concomitantly decreases Th2-cellular and humoral responses, indicating a potential use of alum/TLR-based vaccines.

Decontamination of genetically modified mice strains by embryo transfer for obtaining SPF colonies in a Brazilian animal facility / Descontaminação de linhagens de camundongos geneticamente modificadas por transferência embrionária para obtenção de colônias SPF em um biotério brasileiro (São Paulo, SP)

The introduction of new strains of mice in specific pathogen-free (SPF) animal facilities should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers. To meet this need, animals should be rederived to reduce infection risk and thus avoid research interference caused by loss of animal health status and welfare. The objective of this study was to implement mice embryo transfer in the laboratory mouse facility of the Department of Immunology at the Institute of Biomedical Sciences/University of São Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive genetically modified mouse strains with undefined sanitary status, received from different research and educational institutions. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by natural means and transferred into the oviducts of SPF pseudo-pregnant female mice. All surgical procedures were performed under aseptic conditions. A total of 625 embryos were transferred into the recipients. 148 pups were born, of which 140 were reared. Viruses, bacteria and intestinal protozoa were eliminated using this technique. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility. With these results, we can stimulate the use of embryo transfer technique between rodent facilities in Brazil and thus encourage the distribution of better models to our scientific community.(AU)

A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios livres de patógenos específicos (SPF) deve ser realizada com critérios para evitar a quebra das barreiras sanitárias. Dessa forma, os animais devem ser rederivados para reduzir os riscos de infecção e evitar as interferências provocadas pela perda do status sanitário e do bem-estar dos animais. O objetivo deste estudo foi implementar a transferência de embriões murinos no Biotério do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, Brasil. As transferências embrionárias foram realizadas para rederivar linhagens de camundongos geneticamente modificadas com status sanitário não conhecido, recebidas de diferentes instituições de pesquisa e de ensino. Os embriões em duas células foram obtidos pelos métodos naturais e transferidos para os ovidutos de fêmeas de camundongos SPF pseudoprenhas. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob condições assépticas. Um total de 625 embriões foram transferidos para as receptoras. Foram obtidos 148 filhotes nascidos vivos, destes 140 foram desmamados. Por meio desta técnica, foram eliminados vírus, bactérias e protozoários intestinais. A melhora no status microbiológico dos camundongos permitiu a expansão destes em nossa colônia SPF. Com esses resultados, podemos promover o uso da técnica de transferência de embriões entre os biotérios brasileiros e assim incentivar a distribuição de modelos mais adequados para a nossa comunidade científica.(AU)

Decontamination of genetically modified mice strains by embryo transfer for obtaining SPF colonies in a Brazilian animal facility / Descontaminação de linhagens de camundongos geneticamente modificadas por transferência embrionária para obtenção de colônias SPF em um biotério brasileiro (São Paulo, SP)

The introduction of new strains of mice in specific pathogen-free (SPF) animal facilities should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers. To meet this need, animals should be rederived to reduce infection risk and thus avoid research interference caused by loss of animal health status and welfare. The objective of this study was to implement mice embryo transfer in the laboratory mouse facility of the Department of Immunology at the Institute of Biomedical Sciences/University of São Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive genetically modified mouse strains with undefined sanitary status, received from different research and educational institutions. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by natural means and transferred into the oviducts of SPF pseudo-pregnant female mice. All surgical procedures were performed under aseptic conditions. A total of 625 embryos were transferred into the recipients. 148 pups were born, of which 140 were reared. Viruses, bacteria and intestinal protozoa were eliminated using this technique. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility. With these results, we can stimulate the use of embryo transfer technique between rodent facilities in Brazil and thus encourage the distribution of better models to our scientific community.(AU)

A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios livres de patógenos específicos (SPF) deve ser realizada com critérios para evitar a quebra das barreiras sanitárias. Dessa forma, os animais devem ser rederivados para reduzir os riscos de infecção e evitar as interferências provocadas pela perda do status sanitário e do bem-estar dos animais. O objetivo deste estudo foi implementar a transferência de embriões murinos no Biotério do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, Brasil. As transferências embrionárias foram realizadas para rederivar linhagens de camundongos geneticamente modificadas com status sanitário não conhecido, recebidas de diferentes instituições de pesquisa e de ensino. Os embriões em duas células foram obtidos pelos métodos naturais e transferidos para os ovidutos de fêmeas de camundongos SPF pseudoprenhas. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob condições assépticas. Um total de 625 embriões foram transferidos para as receptoras. Foram obtidos 148 filhotes nascidos vivos, destes 140 foram desmamados. Por meio desta técnica, foram eliminados vírus, bactérias e protozoários intestinais. A melhora no status microbiológico dos camundongos permitiu a expansão destes em nossa colônia SPF. Com esses resultados, podemos promover o uso da técnica de transferência de embriões entre os biotérios brasileiros e assim incentivar a distribuição de modelos mais adequados para a nossa comunidade científica.(AU)

Detecção de Proteus mirabilis nas fezes de camundongos spf / /Detection of Proteus mirabilis in specifc pathogen free mice feces

O presente estudo teve como objetivo apresentar os resultados de pesquisa de positividade do microorganismo Proteus mirabilis em camundongos das linhagens C57BL/6, BALB/c e BALB/c Nude, originários do setor de criação de camundongos livres de patógenos específicos (SPF) do Centro de Bioterismo da Faculdade de Medicina da USP e relatar a importância do isolamento deste microorganismo em colônias de animais. Para tanto, amostras de fezes de 71 camundongos da linhagem C57BL/6, 48 camundongos da linhagem BALB/c e 26 camundongos da linhagem BALB/c Nude, foram semeadas em meios específicos para bactérias gram negativas e diagnosticado no Enterokit B da Probac do Brasil. Nossos resultados mostraram que, as linhagens de camundongos C57BL/6, BALB/c e BALB/c Nude apresentaram P.mirabilis nas fezes, nas porcentagens de 80,3%, 62,5% e 73,1% respectivamente, sendo inadequadas para utilização em protocolos experimentais das áreas de radiobiologia, imunologia, oncologia e cirurgias experimentais invasivas, por interferirem potencialmente nos resultados destas áreas. CEUA nº 251/11.(AU)

This study aimed to present the positive results of Proteus mirabilis research from strains inbred mice C57BL/6, BALB/c and BALB/c Nude, originating from the sector of Specific Pathogen Free (SPF) mice - Animal Facilities of Faculdade de Medicina (USP University of São Paulo) and report the importance of isolation of this microorganism in colonies of animals. For this, stool samples from: 71 C57BL/6, 48 BALB/c and 26 BALB /c Nude inbred mice, were inoculated in cultural bacteria specific media and diagnosed in the B Enterokit Probac-Brasil. Our results showed that the strains of C57BL/6, BALB/c and BALB/c Nude presented P.mirabilis in stool, percentages of 80.3%, 62.5% and 73.1% respectively, being unsuitable for use in experimental protocols in the fields of radiobiology, immunology, oncology, and experimental invasive surgeries by interfering mainly on the results of these areas. CEUA No. 251/11.(AU)

Núcleo de desenvolvimento em fertilização in vitro I. Estudo da resposta à superovulação e viabilidade embrionária / / Genter for development in vitro fertilization. I.Study of response to super ovulation and embryo viability

Este trabalho tem como objetivo implantar novas tecnologias na área de bioterismo, com a formação de um núcleo de desenvolvimento de Fertilização In Vitro (FIV) para criação de um banco de embriões de camundongos isogênicos, transgênicos ou "nocautes", estudando inicialmente a superovulação e viabilidade embrionária de diferentes linhagens de camundongos. As fêmeas com oito semanas foram estimuladas com os hormônios PMSG e HCG, em seguida, eutanasiadas para obtenção dos oócitos e os machos, das respectivas linhagens, foram também eutanasiados para obtenção dos espermatozóides. Após a fertilização in vitro, os embriões em duas células foram coletados e transferidos para fêmeas pseudográvidas. Os resultados da FIV mostraram que as linhagens 129sv ABR, CPA, C5BL/10 e ALOX apresentaram maior número de oócitos em relação às demais linhagens testadas: A/J, BALB/c IL-4, BALB/c SCID, C57BL/6 TLR2, CBA, C57BL/6 CD1, BALB/c CARECA, C57BL/6 IL-4 e C57BL/6 TLR4. Com relação ao - nº de oócitos/ nº de embriões em duas células - as linhagens A/J (42/30) e CBA (20/14), apesar de apresentarem um número de oócitos inferior quando comparamos com os animais da linhagem 129 (165/53), apresentaram um maior número de embriões em duas células. Com a linhagem C57BL/10.A, o número de oócitos (119) foi maior em comparação com a linhagem A/J e CBA, no entanto, o número de embriões em duas células obtidos pela linhagem C57BL/10.A (22) foi menor em comparação com os animais da linhagem A/J e CBA. A linhagem XPA, apresentou grande número de oócitos e também de embriões em duas células (116/76). A eficiência da FIV foi validada pelos primeiros nascimentos de embriões, obtidos com animais das linhagens C57BL/6 IL4, C57BL/6 TLR2 e da linhagem 129sv ABR. Em conjunto, os nossos resultados mostram que a resposta à superovulação é um fenômeno linhagem específico, além disso, dentro da particularidade de cada linhagem, os embriões que se diferenciaram em duas células são capazes de ser gerados em fêmeas receptoras e se desenvolveram até o nascimento. Com essa ferramenta, abrimos novas possibilidades de avanços tecnológicos na área de bioterismo. Certificado CEUA nº 098/11 HCFMUSP.(AU)

This study aimed to deploy new technologies in the Laboratory Animal Science, with the formation of a core development in vitro fertilization (IVF) to create an embryo bank of inbred mice, transgenic or “knockout”, initially studying the super ovulation and embryo viability of different strains of mice. Females 8 weeks, were stimulated with PMSG and HCG hormones then euthanized to obtain the oocytes and males, their lines were also euthanized to obtain sperm. After in vitro fertilization, the embryo into two cells were collected and transferred to pseudo-pregnant females. The IVF results showed that strains 129sv ABR, XPA, and C57BL/10.A ALOX had a higher number of oocytes compared with other tested strains: A/J, BALB/c IL-4, BALB/c SCID, C57BL/TLR2 6, CBA, C57BL/6 CD1, BALB/c BALD, C57BL/6 IL -4 and C57BL/6 TLR4. With respect to -n oocyte/embryo -n into two cells - the strains A/J (42/30) and CBA (20/14), although with a lower number of oocytes when compared with the strain 129 (165/53), showed a higher number of embryos in two cells. With the line C57BL/10.A, the number of oocytes (119) was higher in comparison with strain A/J and CBA, however, the number of two-cell embryos obtained by C57BL/10.A (22) was lower compared with animals from the strain A/J and CBA. The strain XPA, showed a large number of oocytes and embryos also two cells (116/76). The efficiency of IVF, has been validated by the first births of embryos obtained from animals of the strains C57BL/6 IL4, C57BL/6 and TLR2 strain 129sv ABR. Together, our results showed that the response to ovulation is a super strain-specific phenomenon, moreover, within the particularity of each strain, the embryos which differentiated into two cells are able to be generated in recipient females and develop to the birth. With this tool, we have opened new possibilities for technological advances in the Laboratory Animal Science. Certified CEUA Nº 098/11 HCFMUSP.(AU)

Núcleo de desenvolvimento em fertilização in vitro I. Estudo da resposta à superovulação e viabilidade embrionária / / Genter for development in vitro fertilization. I.Study of response to super ovulation and embryo viability

Este trabalho tem como objetivo implantar novas tecnologias na área de bioterismo, com a formação de um núcleo de desenvolvimento de Fertilização In Vitro (FIV) para criação de um banco de embriões de camundongos isogênicos, transgênicos ou "nocautes", estudando inicialmente a superovulação e viabilidade embrionária de diferentes linhagens de camundongos. As fêmeas com oito semanas foram estimuladas com os hormônios PMSG e HCG, em seguida, eutanasiadas para obtenção dos oócitos e os machos, das respectivas linhagens, foram também eutanasiados para obtenção dos espermatozóides. Após a fertilização in vitro, os embriões em duas células foram coletados e transferidos para fêmeas pseudográvidas. Os resultados da FIV mostraram que as linhagens 129sv ABR, CPA, C5BL/10 e ALOX apresentaram maior número de oócitos em relação às demais linhagens testadas: A/J, BALB/c IL-4, BALB/c SCID, C57BL/6 TLR2, CBA, C57BL/6 CD1, BALB/c CARECA, C57BL/6 IL-4 e C57BL/6 TLR4. Com relação ao - nº de oócitos/ nº de embriões em duas células - as linhagens A/J (42/30) e CBA (20/14), apesar de apresentarem um número de oócitos inferior quando comparamos com os animais da linhagem 129 (165/53), apresentaram um maior número de embriões em duas células. Com a linhagem C57BL/10.A, o número de oócitos (119) foi maior em comparação com a linhagem A/J e CBA, no entanto, o número de embriões em duas células obtidos pela linhagem C57BL/10.A (22) foi menor em comparação com os animais da linhagem A/J e CBA. A linhagem XPA, apresentou grande número de oócitos e também de embriões em duas células (116/76). A eficiência da FIV foi validada pelos primeiros nascimentos de embriões, obtidos com animais das linhagens C57BL/6 IL4, C57BL/6 TLR2 e da linhagem 129sv ABR. Em conjunto, os nossos resultados mostram que a resposta à superovulação é um fenômeno linhagem específico, além disso, dentro da particularidade de cada linhagem, os embriões que se diferenciaram em duas células são capazes de ser gerados em fêmeas receptoras e se desenvolveram até o nascimento. Com essa ferramenta, abrimos novas possibilidades de avanços tecnológicos na área de bioterismo. Certificado CEUA nº 098/11 HCFMUSP.

This study aimed to deploy new technologies in the Laboratory Animal Science, with the formation of a core development in vitro fertilization (IVF) to create an embryo bank of inbred mice, transgenic or “knockout”, initially studying the super ovulation and embryo viability of different strains of mice. Females 8 weeks, were stimulated with PMSG and HCG hormones then euthanized to obtain the oocytes and males, their lines were also euthanized to obtain sperm. After in vitro fertilization, the embryo into two cells were collected and transferred to pseudo-pregnant females. The IVF results showed that strains 129sv ABR, XPA, and C57BL/10.A ALOX had a higher number of oocytes compared with other tested strains: A/J, BALB/c IL-4, BALB/c SCID, C57BL/TLR2 6, CBA, C57BL/6 CD1, BALB/c BALD, C57BL/6 IL -4 and C57BL/6 TLR4. With respect to -n oocyte/embryo -n into two cells - the strains A/J (42/30) and CBA (20/14), although with a lower number of oocytes when compared with the strain 129 (165/53), showed a higher number of embryos in two cells. With the line C57BL/10.A, the number of oocytes (119) was higher in comparison with strain A/J and CBA, however, the number of two-cell embryos obtained by C57BL/10.A (22) was lower compared with animals from the strain A/J and CBA. The strain XPA, showed a large number of oocytes and embryos also two cells (116/76). The efficiency of IVF, has been validated by the first births of embryos obtained from animals of the strains C57BL/6 IL4, C57BL/6 and TLR2 strain 129sv ABR. Together, our results showed that the response to ovulation is a super strain-specific phenomenon, moreover, within the particularity of each strain, the embryos which differentiated into two cells are able to be generated in recipient females and develop to the birth. With this tool, we have opened new possibilities for technological advances in the Laboratory Animal Science. Certified CEUA Nº 098/11 HCFMUSP.

Detecção de Proteus mirabilis nas fezes de camundongos spf / /Detection of Proteus mirabilis in specifc pathogen free mice feces

O presente estudo teve como objetivo apresentar os resultados de pesquisa de positividade do microorganismo Proteus mirabilis em camundongos das linhagens C57BL/6, BALB/c e BALB/c Nude, originários do setor de criação de camundongos livres de patógenos específicos (SPF) do Centro de Bioterismo da Faculdade de Medicina da USP e relatar a importância do isolamento deste microorganismo em colônias de animais. Para tanto, amostras de fezes de 71 camundongos da linhagem C57BL/6, 48 camundongos da linhagem BALB/c e 26 camundongos da linhagem BALB/c Nude, foram semeadas em meios específicos para bactérias gram negativas e diagnosticado no Enterokit B da Probac do Brasil. Nossos resultados mostraram que, as linhagens de camundongos C57BL/6, BALB/c e BALB/c Nude apresentaram P.mirabilis nas fezes, nas porcentagens de 80,3%, 62,5% e 73,1% respectivamente, sendo inadequadas para utilização em protocolos experimentais das áreas de radiobiologia, imunologia, oncologia e cirurgias experimentais invasivas, por interferirem potencialmente nos resultados destas áreas. CEUA nº 251/11.

This study aimed to present the positive results of Proteus mirabilis research from strains inbred mice C57BL/6, BALB/c and BALB/c Nude, originating from the sector of Specific Pathogen Free (SPF) mice - Animal Facilities of Faculdade de Medicina (USP – University of São Paulo) and report the importance of isolation of this microorganism in colonies of animals. For this, stool samples from: 71 C57BL/6, 48 BALB/c and 26 BALB /c Nude inbred mice, were inoculated in cultural bacteria specific media and diagnosed in the B Enterokit Probac-Brasil. Our results showed that the strains of C57BL/6, BALB/c and BALB/c Nude presented P.mirabilis in stool, percentages of 80.3%, 62.5% and 73.1% respectively, being unsuitable for use in experimental protocols in the fields of radiobiology, immunology, oncology, and experimental invasive surgeries by interfering mainly on the results of these areas. CEUA No. 251/11.

Triagem de Helicobacter spp. em fezes de roedores de laboratório através da técnica de PCR / / Screening for Helicobacter spp inrodent feces laboratory using PCR technique

Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC 3' E R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' que amplificam um produto de 374 Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5 CTATGACGGGTApb. Separados por eletroforese em gel de agarose, os produtos foram visualizados e fotodocumentados sob luz ultravioleta.A técnica de PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 18% da linhagem C57BL/6, 52% da linhagem BALB/c, 62% da linhagem Swiss. Em ratos da linhagem Wistar, foram detectados 28% de positividade e em hamster, 44%. Esses resultados sugerem que a técnica de PCR empregada foi eficaz para a triagem de Helicobacter spp em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP. (AU)

This work aimed to optimize the screening of the bacterium Helicobacter spp in sanitary control program of laboratory animals, using the PCR (Polymerase Chain Reaction). Fifty stool samples from each strain or species: C57BL/6, BALB/c, Swiss, Hamster and Wistar rats were subjected to PCR using the primers F: 5 CTATGACGGGTATCCGGC 3' and R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' that amplofy 374 bp product. Separated by agarose gel electrophoresis, products were visualized and photographed under ultraviolet light. The PCR technique allowed the detection of positive mice, 18% of C57BL/6, 52% of the strain BALB/c, 62% of Swiss strain. In Wistar rats were detected 28% ´possivity and hamster 44%. These results suggest that the PCR technique used was effective in screening for Helicobacter spp in colonies of laboratory animals. Certified CRAU Nº 251/11 HCFMUSP.(AU)

Perfil bioquímico dos animais de laboratório do biotério da Faculdade de Medicina da USP pt / / Biochemical profile of laboratory animals of the Medical School USP

Objetivo: Os parãmetros bioquímicos são utilizados em pesquisas cientificas, em conjunto com outros fatores, para análise dos resultados experimentais. Animais de laboratório criados em diferentes biotérios apresentam variações em seus valores devido a dieta, manejo, estado sanitário, idade, vias de coleta do sangue e outros interferentes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil bioquímico de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais criados pelo Centro de bioterismo da FMUSP. Materiais e Métodos: Foram utilizados 20 camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57Bl/6 e da heterogênica Swiss; 40 ratos Wistar, 40 hamsters Golden e 40 coelhos New Zealand. Os exames realizados foram: uréia/BUN (Blood Urea Nitrogen), creatinina, proteínas totais, albumina e globulinas, ferro, fósforo, glicose, colesterol total e suas frações LDI (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (Very Low Density Lipoprotein), Bilirrubina total e frações (direta, indireta), cloretos, magnésio, triglicerides, Alt/AST (alanina aminotransferase, aspartato aminotransaminase), amônia, cálcio, ALP (fosfatase alcalina) e LDH (desidrogenase lática), determinados por fotocolorimetria semi-automática (Cobas Mira) e kits bioclin, Labtest e Byosystems. Resultados: Apresentados pelas médias e os erros padrões das concentrações de analitos, no plasma, agrupados por sexo. Conclusão: Foram determinados os perfis bioquímicos de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais do centro de Bioterismo da FMUSP, oferecendo uma ferramenta valiosa aos pesquisadores ao analisar seus resultados experimentais. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP. (AU)

Objective: The biochemical parameters are used in scientific research in conjunction with other factors, to analyze the experimental results. Laboratory animals raised in different animal houses have variations in their values due to diet, management health status, age, the process of colecting blood and other interferences. Thus, the objective of this study was to created by conventional Bioterty Center FMUSP . Materials and Methods: We used 20 isogenic strains of mice BALB/6 and C57BL/6 and Swiss heterogeneous, 40 Wistat rats, 40 rabbits and 40 hamsters Golden New Zealand. The tests performed were: urea / BUN (Blood Urea Nitrogen), creatine, total protein, albumin and globulins, iron, phosphorus, glucose, total cholesterol and LDL (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (very Low Density Lipoprotein), total bilirubin and fractions (direct, indirect), chlondes, magnesium, triglucerides, ALT/AST (alanine aminotransferase, aspartate aminotransaminase), ammonium, calcium, ALP (alkaline phosphatase) and LDH (lactate denydrogenase), certain by semi-automatic spectrophotometer (Cobas Mira) and Bioclin kitas, and Labtest Biosystems. Results: Presented by the means and standard errors of the concentrations of analytes in plasma, grouped by sex. Conclusion: We determined the biochemical profiles of mice, rats, hamsters and rabbits conventional Biotery FMUSP Center, offering a valuable tool for researchers to analyze their experimental results. Certified No 251/11 CEAU HCFMUSP.(AU)

Estudo comparativo dos valores hematológicos entre sexo e categorias sanitárias de camundongos C57BL/6 e BALB/c / Hematological comparative study between sex and sanitary categories of C57BL/6 and BALB/C Mouse

A finalidade deste estudo é oferecer aos pesquisadores dados que possam ser relevantes na escolha do modelo experimental a ser utilizado, comparando os valores hematologicos de camundongos de linhagens isogênicas, mantidos em biotérios Convencional e SPF - (Specific Pathogen Free). foram utilizados 80 camundongos selecionados por categoria sanitária e sexo, sem sinais clínicos de doenças, acima de 10 semanas. O perfil gematológico analisado foi determinado pelo processo de citometria, no qual a separação de entrócitos e leucócitos ocorre por volume celular, sendo utilizada a identificação celular pelo método em suspensão e qualificação. Os exames realizados foram eitrograma e leucograma no equipamento (Celm CC510) e os derivados hematológicos como índices hematimétricos; a quantificação morfológica de leucócitos e eritrócitos foram determinadas por varredura (Panótico-comercial) e hemoglobina por espectrofolometria (Celm E210D). A comparação dos valores hematológicos de camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57BL/6, mantidos em biotérios Convencional e SPF não apresentou diferenças entre os parâmetros: contagem de hemácias, hematoctiyo, hemoglobina corpuscular média; contagem de leucócitos, monócitos, linfócitos e basofilos. Os eosinófilos apresentam valores diferentes entre os secos e entre as categorias sanitárias, em ambas as linhagens. Os neutrófilos, nas fêmeas C57Bl/6, foram superiores em número, nos convencionais quando comparadas às fêmeas SPF. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.(AU)

The purpose of this study was to provide researchers with data that may be relevant in the choice of experimental model to be used, comparing the haematological values of isogenic strains of mice kept in conventional animal facilities and SPF - (Specific Pathogen Free). 80 mice were used for selected health category and sex, without clinical signs of disease, over 10 weeks, The blood profile analysis was determined by flow cytometry process, where the separation of erythrocytes and leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell suspension method and quantification. The tests were performed on the equipment erythrogram and WBC (Celma CC510) and RBC indices as derived from hematological, morphological quantification of leukocytes and erythrocytes were determined by scanning (Panótico-commercial) and hemoglobin by spectrophometry (Celm, E210D). Comparison of leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell sushaematological values of isogenic strains of mice BALB/c and C57BL/6, kept in conventional animal facilities and SPF, showed no differences between the parameters: erythrocyte count, hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, hemoglobin concentration mean corpuscular; WBC, monocytes, lymphocytes, and basophils. Eosinophils showed different values between the sexes and between health categories, in both strains. Neutrophilis, in the female C57BL/6 were greater in number in females qhen compared to conventional SPF. Certified nº 251/11 CEAU HCFMUSP.(AU)

Estudo comparativo dos valores hematológicos entre sexo e categorias sanitárias de camundongos C57BL/6 e BALB/c / Hematological comparative study between sex and sanitary categories of C57BL/6 and BALB/C Mouse

A finalidade deste estudo é oferecer aos pesquisadores dados que possam ser relevantes na escolha do modelo experimental a ser utilizado, comparando os valores hematologicos de camundongos de linhagens isogênicas, mantidos em biotérios Convencional e SPF - (Specific Pathogen Free). foram utilizados 80 camundongos selecionados por categoria sanitária e sexo, sem sinais clínicos de doenças, acima de 10 semanas. O perfil gematológico analisado foi determinado pelo processo de citometria, no qual a separação de entrócitos e leucócitos ocorre por volume celular, sendo utilizada a identificação celular pelo método em suspensão e qualificação. Os exames realizados foram eitrograma e leucograma no equipamento (Celm CC510) e os derivados hematológicos como índices hematimétricos; a quantificação morfológica de leucócitos e eritrócitos foram determinadas por varredura (Panótico-comercial) e hemoglobina por espectrofolometria (Celm E210D). A comparação dos valores hematológicos de camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57BL/6, mantidos em biotérios Convencional e SPF não apresentou diferenças entre os parâmetros: contagem de hemácias, hematoctiyo, hemoglobina corpuscular média; contagem de leucócitos, monócitos, linfócitos e basofilos. Os eosinófilos apresentam valores diferentes entre os secos e entre as categorias sanitárias, em ambas as linhagens. Os neutrófilos, nas fêmeas C57Bl/6, foram superiores em número, nos convencionais quando comparadas às fêmeas SPF. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

The purpose of this study was to provide researchers with data that may be relevant in the choice of experimental model to be used, comparing the haematological values of isogenic strains of mice kept in conventional animal facilities and SPF - (Specific Pathogen Free). 80 mice were used for selected health category and sex, without clinical signs of disease, over 10 weeks, The blood profile analysis was determined by flow cytometry process, where the separation of erythrocytes and leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell suspension method and quantification. The tests were performed on the equipment erythrogram and WBC (Celma CC510) and RBC indices as derived from hematological, morphological quantification of leukocytes and erythrocytes were determined by scanning (Panótico-commercial) and hemoglobin by spectrophometry (Celm, E210D). Comparison of leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell sushaematological values of isogenic strains of mice BALB/c and C57BL/6, kept in conventional animal facilities and SPF, showed no differences between the parameters: erythrocyte count, hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, hemoglobin concentration mean corpuscular; WBC, monocytes, lymphocytes, and basophils. Eosinophils showed different values between the sexes and between health categories, in both strains. Neutrophilis, in the female C57BL/6 were greater in number in females qhen compared to conventional SPF. Certified nº 251/11 CEAU HCFMUSP.

Perfil bioquímico dos animais de laboratório do biotério da Faculdade de Medicina da USP / / Biochemical profile of laboratory animals of the Medical School USP

Objetivo: Os parãmetros bioquímicos são utilizados em pesquisas cientificas, em conjunto com outros fatores, para análise dos resultados experimentais. Animais de laboratório criados em diferentes biotérios apresentam variações em seus valores devido a dieta, manejo, estado sanitário, idade, vias de coleta do sangue e outros interferentes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil bioquímico de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais criados pelo Centro de bioterismo da FMUSP. Materiais e Métodos: Foram utilizados 20 camundongos das linhagens isogênicas BALB/c e C57Bl/6 e da heterogênica Swiss; 40 ratos Wistar, 40 hamsters Golden e 40 coelhos New Zealand. Os exames realizados foram: uréia/BUN (Blood Urea Nitrogen), creatinina, proteínas totais, albumina e globulinas, ferro, fósforo, glicose, colesterol total e suas frações LDI (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (Very Low Density Lipoprotein), Bilirrubina total e frações (direta, indireta), cloretos, magnésio, triglicerides, Alt/AST (alanina aminotransferase, aspartato aminotransaminase), amônia, cálcio, ALP (fosfatase alcalina) e LDH (desidrogenase lática), determinados por fotocolorimetria semi-automática (Cobas Mira) e kits bioclin, Labtest e Byosystems. Resultados: Apresentados pelas médias e os erros padrões das concentrações de analitos, no plasma, agrupados por sexo. Conclusão: Foram determinados os perfis bioquímicos de camundongos, ratos, hamsters e coelhos convencionais do centro de Bioterismo da FMUSP, oferecendo uma ferramenta valiosa aos pesquisadores ao analisar seus resultados experimentais. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

Objective: The biochemical parameters are used in scientific research in conjunction with other factors, to analyze the experimental results. Laboratory animals raised in different animal houses have variations in their values due to diet, management health status, age, the process of colecting blood and other interferences. Thus, the objective of this study was to created by conventional Bioterty Center FMUSP . Materials and Methods: We used 20 isogenic strains of mice BALB/6 and C57BL/6 and Swiss heterogeneous, 40 Wistat rats, 40 rabbits and 40 hamsters Golden New Zealand. The tests performed were: urea / BUN (Blood Urea Nitrogen), creatine, total protein, albumin and globulins, iron, phosphorus, glucose, total cholesterol and LDL (Low Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), VLDL (very Low Density Lipoprotein), total bilirubin and fractions (direct, indirect), chlondes, magnesium, triglucerides, ALT/AST (alanine aminotransferase, aspartate aminotransaminase), ammonium, calcium, ALP (alkaline phosphatase) and LDH (lactate denydrogenase), certain by semi-automatic spectrophotometer (Cobas Mira) and Bioclin kitas, and Labtest Biosystems. Results: Presented by the means and standard errors of the concentrations of analytes in plasma, grouped by sex. Conclusion: We determined the biochemical profiles of mice, rats, hamsters and rabbits conventional Biotery FMUSP Center, offering a valuable tool for researchers to analyze their experimental results. Certified No 251/11 CEAU HCFMUSP.

Triagem de Helicobacter spp. em fezes de roedores de laboratório através da técnica de PCR / / Screening for Helicobacter spp inrodent feces laboratory using PCR technique

Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5’ CTATGACGGGTATCCGGC 3' E R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' que amplificam um produto de 374 Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou espécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5’ CTATGACGGGTApb. Separados por eletroforese em gel de agarose, os produtos foram visualizados e fotodocumentados sob luz ultravioleta.A técnica de PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 18% da linhagem C57BL/6, 52% da linhagem BALB/c, 62% da linhagem Swiss. Em ratos da linhagem Wistar, foram detectados 28% de positividade e em hamster, 44%. Esses resultados sugerem que a técnica de PCR empregada foi eficaz para a triagem de Helicobacter spp em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP.

This work aimed to optimize the screening of the bacterium Helicobacter spp in sanitary control program of laboratory animals, using the PCR (Polymerase Chain Reaction). Fifty stool samples from each strain or species: C57BL/6, BALB/c, Swiss, Hamster and Wistar rats were subjected to PCR using the primers F: 5’ CTATGACGGGTATCCGGC 3' and R: 5' ATTCCACCTACCTCTCCCA 3' that amplofy 374 bp product. Separated by agarose gel electrophoresis, products were visualized and photographed under ultraviolet light. The PCR technique allowed the detection of positive mice, 18% of C57BL/6, 52% of the strain BALB/c, 62% of Swiss strain. In Wistar rats were detected 28% ´possivity and hamster 44%. These results suggest that the PCR technique used was effective in screening for Helicobacter spp in colonies of laboratory animals. Certified CRAU Nº 251/11 HCFMUSP.

Detecção de Mycoplasma pulmonis no trato respiratório superior em roedores através da técnica de PCR / /Mycoplasma pulmonis detection in the rodents respiratoru tract by PCR

Objetivo: apresentar a técnica de PCR para a detecção de Mycoplasma pulmonis das colônias convencionais de camundongos das linhagens isogênicas C57BL/6, BALB/c e heterogênica Swiss, e ratos Wistar. Material e Métodos: A extração do DNA foi realizada a partir de fragmento de traqueia, utilizando para a reação de PCR os oligonucleotídeos iniciadores F: 5- CA TGT TCT TGG CCA CCTAT - 3 e R:5 - ATC CCT CAA TGA GCT GGT TC - 3' que amplificam um produto de 152 pb. Os produtos obtidos foram separados por eletrólise em gel de agarose. A visualização e fotodocumentação foram realizadas sob luz ultravioleta. Resultados e conclusões: A PCR possibilitou a detecção de camundongos positivos, sendo 38% da linhagem C57BL/6, 24% da linhagem BALB/c, 14% da linhagem heterogênica Swiss e 52% de ratos Wistar. Esses resultados sugerem que o emprego da técnica de PCR foi eficaz para o diagnóstico de Mycoplasma pulmonis em colônias de animais de laboratório. Certificado CEAU nº 251/11 HCFMUSP. (AU)

Objective: To introduce the PCR technique for detection of Mycoplasma pulmonis in conventional colony of mice inbred strains C5BL/6, BALB/c, outbred Swiss, and Whistar rats. Methods: DNA extraction was made from a fragment of the trachea, using the PCR primers F: 5-CA TCT TGG TGT CCA CCTAT - 3 and R:5 - ATC CCT CAA TGA GCT GGT TC-3' which amplify a product of 152 bp. The products were separated by agarose gel electrophoresis. The viewing and photo documentation were performed under ultravioleta light. Results and Conclusion: The PCR allowed the detection of positive mice, 38% of C57BL/6, 24% of BALB/c 14% of Swiss and 52% of Wistar rats. These results suggest that the use of PCR technique was effective for the diagnosis of Mycoplasma pulmonis in colonies of laboratory animals. Certified CEAU nº 251/11 HCFMUSP.(AU)