Passive administration of purified secretory IgA from human colostrum induces protection against Mycobacterium tuberculosis in a murine model of progressive pulmonary infection.

BACKGROUND: Immunoglobulin A is the most abundant isotype in secretions from mucosal surfaces of the gastrointestinal, respiratory and genitourinary tracts and in external secretions such as colostrum, breast milk, tears and saliva. The high concentration of human secretory IgA (hsIgA) in human colostrum strongly suggests that it should play an important role in the passive immune protection against gastrointestinal and respiratory infections. MATERIALS AND METHODS: Human secretory IgA was purified from colostrum. The reactivity of hsIgA against mycobacterial antigens and its protective capacity against mycobacterial infection was evaluated. RESULTS: The passive administration of hsIgA reduces the pneumonic area before challenge with M. tuberculosis. The intratracheal administration of M. tuberculosis preincubated with hsIgA to mice greatly reduced the bacterial load in the lungs and diminished lung tissue injury. CONCLUSIONS: HsIgA purified from colostrum protects against M. tuberculosis infection in an experimental mouse model.

The effect of the administration of human gamma globulins in a model of BCG infection in mice.

The effect of the administration of a commercial preparation of human gamma globulins has been evaluated in a mouse model of intranasal infection with BCG. First, we demonstrated the passage of specific antibodies to saliva and lung lavage following the intranasal or intraperitoneal administration to mice of human gamma globulins. This treatment of mice inhibited BCG colonization of the lungs (p < 0.01). A similar inhibitory effect was observed after infection of mice with gamma globulin opsonized BCG organisms (p < 0.01). These results are relevant for the development of new strategies for the control and treatment of tuberculosis.

Purification of recombinant DNA-derived factor IX produced in transgenic pig milk and fractionation of active and inactive subpopulations.

Transgenic animal bioreactors can be engineered to make gram per liter quantities of complex recombinant glycoproteins in milk. However, little is known about the limitations in post-translational processing that occurs for very complex proteins and how this impacts the task of purification. We report on the purification of recombinant factor IX (rFIX) from the milk of transgenic pigs having an expression level of 2-3 g rFIX/(l(-1) h(-1)), an expression level that is about 20-fold higher than previously reported. This purification process efficiently recovers highly active rFIX and shows that even complex mixtures like pig milk, which contains 60 g/l total endogenous milk protein and multiple subpopulations of rFIX, can be processed using conventional, non-immunoaffinity chromatographic methods. Without prior removal of caseins, heparin-affinity chromatography was used to first purify the total population of rFIX at greater than 90% yield. After the total population was isolated, the biologically active and inactive subpopulations were fractionated by high-resolution anion exchange chromatography using an ammonium acetate elution. Capillary isoelectric focusing of the active and inactive rFIX fractions demonstrated that the active subpopulations are the most acidic.

Prophylactic effect of administration of human gamma globulins in a mouse model of tuberculosis.

The protective effect of human gamma globulins on Mycobacterium tuberculosis infection was evaluated in a mouse model of intratracheal infection. Animals receiving human gamma globulins intranasally, 2h before intratracheal challenge showed a significant decrease in lung bacilli load compared to non-treated animals in different time intervals of up to 2 months after challenge. The same effect was obtained when M. tuberculosis was pre-incubated with the gamma globulin before challenge. The protective effect of the gamma-globulin formulation was abolished after pre-incubation with M. tuberculosis. These results suggest a potential role of specific antibodies in the defence against mycobacterial infections.

Purificación de inmunoglobulina A secretora a partir de calostro humano / Purification of secretory immunoglobulin A from human colostrum

La inmunoglobulina A (IgA) es el isotipo de anticuerpo más abundante en las secreciones de las superficies mucosales del tracto gastrointestinal, respiratorio y genitourinario y en secreciones externas como el calostro, la leche materna, las lágrimas y la saliva. En el presente trabajo se obtuvo inmunoglobulina A secretora a partir de calostro humano mediante una combinación de métodos cromatográficos, y su presencia fue demostrada mediante Dot blot. La fracción de IgA fue analizada mediante electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE) bajo condiciones reductoras, obteniéndose una elevada pureza al identificarse la presencia del componente secretor, la cadena pesada y la cadena ligera de dicha inmunoglobulina, con un patrón de migración correspondiente a sus respectivas masas molares(AU)

Immunoglobulin A is the most abundant antibody isotype in secretions from mucosal surfaces of the gastrointestinal, respiratory, and genitourinary tracts and in external secretions such as colostrums, breast milk, tears and saliva. In this study, secretory immunoglobulin A was obtained from human colostrum by a combination of chromatographic methods which was demonstrated by Dot blot. IgA fraction was analyzed by SDS-PAGE electrophoresis under reducing conditions, obtaining a high purity product by identifying the presence of secretory component, heavy and light chains of the immunoglobulin, with a migration pattern corresponding to their respective molecular mass(AU)

Evaluación de la respuesta de anticuerpos hacia antígenos de Pseudomonas aeruginosa / Evaluation of antibodies response to Pseudomonas aeruginosa antigens

Pseudomonas aeruginosa es un patógeno extracelular que genera una respuesta de anticuerpos específicos con utilidad para el diagnóstico y vacunas. En el presente estudio nos propusimos evaluar en suero humano los niveles de anticuerpos contra antígenos relevantes de P aeruginosa. Realizamos la determinación de anticuerpos IgG contra tres exoenzimas, consideradas como factores de virulencia de mayor importancia en infecciones. Este resultado dio paso a la evaluación del reconocimiento de IgG e IgA hacia antígenos de la envoltura celular bacteriana por ELISA de células enteras. Todos los sueros evaluados mostraron títulos de IgG e IgA superiores a los individuos sanos, con excepción de dos muestras de pacientes que no mostraron alto título. Este ensayopermitió analizar el nivel de reconocimiento hacia los antígenos más expuestos de la bacteria que incluyen principalmente LPS y proteínas de membrana externa. Se encontró diferencias entre los valores de densidad óptica a 450 nm de individuos sanos y enfermos. El método usado permitió seleccionar dos sueros de pacientes de diferentes tipos de infecciones que fueron comparados por Western blot. Se observó que aunque los sueros tenían reacción hacia distintos serotipos de P aeruginosa, la intensidad del reconocimiento variaba según el tipo de infección(AU)

Acciones inmunofarmacológicas de las inmunoglobulinas intravenosas / Immune-pharmacological actions of Intravenous Immunoglobulins

Se ha recorrido un largo camino en la comprensión de los mecanismos de acción relativos a la infusión de preparados de inmunoglobulinas intravenosas desde los días donde un crudo de fracción II de Cohn obtenido de plasma humano fue administrado intramuscularmente a pacientes aquejados de agammaglobulinemia de Brutton, hasta nuestros días. Debemos hacer una distinción entre los mecanismos de acción al nivel del patógeno que provoca la enfermedad, de aquellos al nivel de una enfermedad dada provocada por la reacción del huésped contra el patógeno. El efecto de supresión de las inmunoglobulinas intravenosas en las respuestas autoinmunes abre nuevas perspectivas terapéuticas y permite un nuevo acercamiento a la comprensión de los mecanismos básicos que explican la autoinmunidad patológica(AU)

Obtención de albúmina de diferentes especies de mamíferos para uso inmunohematológico en bancos de sangre / Collection of albumin from different species of mammals for use in blood banks immunohematological

La albúmina juega un papel fundamental como componente básico en varios reactivos biológicos para uso diagnóstico. Para la obtención de esta proteína se utilizó plasma hemolítico de diferentes especies de mamíferos (bovina, equina, porcina y ovina), los cuales, fueron sometidos a un proceso de termocoagulación selectiva. Con vista a garantizar la polimerización necesaria se evaluaron diferentes concentraciones de glutaraldehído y glicina en las muestras de albúmina. A los productos finales se les determinaron: pH, concentración de proteínas y cloruro de sodio, contenido de hemopigmentos y polímeros, además se les realizaron ensayos inmunohematológicos que incluyeron: reacciones positivas no deseadas, capacidad potenciadora, presencia de IgG, sustancia de grupo sanguíneo ABO y Lewis y ausencia de actividad neuraminidasa. Se obtuvo un rendimiento promedio de 14.95 g/L, lográndose la polimerización adecuada al adicionar la misma concentración (0.06-.08%) de glutaraldehído y glicina. Las evaluaciones fisicoquímicas e inmunohematológicas realizadas a las muestras de albúminas resultaron satisfactorias, exceptuando el contenido de hemopigmento, que aunque no afectó el resultado del ensayo serológico, si influyó en la coloración final de la solución. En todos los casos las albúminas obtenidas podrían ser empleadas en los ensayos inmuno hematológicos de los bancos de sangre y servicios de transfusiones.

Obtención de albúmina de diferentes especies de mamíferos para uso inmunohematológico en bancos de sangre / Collection of albumin from different species of mammals for use in blood banks immunohematological

La albúmina juega un papel fundamental como componente básico en varios reactivos biológicos para uso diagnóstico. Para la obtención de esta proteína se utilizó plasma hemolítico de diferentes especies de mamíferos (bovina, equina, porcina y ovina), los cuales, fueron sometidos a un proceso de termocoagulación selectiva. Con vista a garantizar la polimerización necesaria se evaluaron diferentes concentraciones de glutaraldehído y glicina en las muestras de albúmina. A los productos finales se les determinaron: pH, concentración de proteínas y cloruro de sodio, contenido de hemopigmentos y polímeros, además se les realizaron ensayos inmunohematológicos que incluyeron: reacciones positivas no deseadas, capacidad potenciadora, presencia de IgG, sustancia de grupo sanguíneo ABO y Lewis y ausencia de actividad neuraminidasa. Se obtuvo un rendimiento promedio de 14.95 g/L, lográndose la polimerización adecuada al adicionar la misma concentración (0.06-.08%) de glutaraldehído y glicina. Las evaluaciones fisicoquímicas e inmunohematológicas realizadas a las muestras de albúminas resultaron satisfactorias, exceptuando el contenido de hemopigmento, que aunque no afectó el resultado del ensayo serológico, si influyó en la coloración final de la solución. En todos los casos las albúminas obtenidas podrían ser empleadas en los ensayos inmuno hematológicos de los bancos de sangre y servicios de transfusiones.(AU)

Reconocimiento de antígenos lipopolisacarídicos de Pseudomonas aeruginosa por sueros humanos

En este trabajo se procedió al reconocimiento de lipopolisacáridos de diferentes serotipos de Pseusodomas aeruginosa por sueros humanos. Los lipopolisacáridos fueron aislados por el método Wespthal y Jann. Se utilizaron un total de 104 sueros de pacientes infectados y donantes voluntarios, provenientes de instalaciones hospitalarias y del Banco de Sangre, para el reconocimiento de antígenos lipopolisacarídicos, mediante el ensayo de Dott Blot. Los resultados mostraron que los serotipos de mayor reconocimiento, por los sueros testados, fueron el O11, O13, O16 y el O15, existiendo diferencias significativas entre ellos (p< 0,05)(AU)

Serotipificación y susceptibilidad antibacteriana de cepas de pseudomonas aeurinosa ailada de pacientes quemados infectados / Serotyping and antibiotic susceptibility of Pseudomonas aeruginosa strains isolated from infected burnt patients

Se ailaron 11 cepas de Pseudonomas aeruginosa en 10 pacientes quemados que se encontraban hospitalizados y se les realizó tipificación serológica y antibíotica para determinar los serotipos más frecuentes en este tipo de pacientes, Los serotipos de mayor frecuencia de aislamiento fueron O4 y el O5. Observamos una marcada resistencia frente a los antibíoticos: carbenicilina 81,8 (por ciento) y la aziocilina 72,7 (por ciento)(AU)

Obtención de albúmina bovina por termocoagulación: análisis físicoquímico e inmunohematológico / Obtainment of bovine albumine by thermo-coagulation: physicochemical and immunohemathological analysis

Para la purificación de albúmina bovina al 30 por ciento se realizaron modificaciones al método de termocoagulación desarrollado industrialmente por Schneider y colaboradores en 1975. Se obtuvo un rendimiento de 26 g/l con un 100 por ciento de pureza determinada por electroforesis en geles de poliacrilamida e inmunoelectroforesis y se utilizaron como control tres albúminas comerciales. En el análisis físicoquímico se tuvieron en cuenta los valores de ph, concentración de proteínas, sodio y cloruro de sodio, contenido de pigmentos hemáticos y cantidad de agregados moleculares determinado por cromatografía de filtración en gel. Para los ensayos inmunohematológicos nos guiamos por las normativas internacionales para el uso de la seroalbúmina bovina. En todos los casos la albúmina LABIOFAM cumplió con los controles de calidad establecidos para su uso en el diagnóstico serológico de los Servicios de Transfusión y Bancos de Sangre.

Obtención de albúmina bovina por termocoagulación: análisis físicoquímico e inmunohematológico / Obtainment of bovine albumine by thermo-coagulation: physicochemical and immunohemathological analysis

Para la purificación de albúmina bovina al 30 por ciento se realizaron modificaciones al método de termocoagulación desarrollado industrialmente por Schneider y colaboradores en 1975. Se obtuvo un rendimiento de 26 g/l con un 100 por ciento de pureza determinada por electroforesis en geles de poliacrilamida e inmunoelectroforesis y se utilizaron como control tres albúminas comerciales. En el análisis físicoquímico se tuvieron en cuenta los valores de ph, concentración de proteínas, sodio y cloruro de sodio, contenido de pigmentos hemáticos y cantidad de agregados moleculares determinado por cromatografía de filtración en gel. Para los ensayos inmunohematológicos nos guiamos por las normativas internacionales para el uso de la seroalbúmina bovina. En todos los casos la albúmina LABIOFAM cumplió con los controles de calidad establecidos para su uso en el diagnóstico serológico de los Servicios de Transfusión y Bancos de Sangre. (AU)