Comprehensive functional characterization of complement factor I rare variant genotypes identified in the SCOPE geographic atrophy cohort.

Rare variants (RVs) in the gene encoding the regulatory enzyme complement factor I (CFI; FI) that reduce protein function or levels increase age-related macular degeneration risk. A total of 3357 subjects underwent screening in the SCOPE natural history study for geographic atrophy secondary to age-related macular degeneration, including CFI sequencing and serum FI measurement. Eleven CFI RV genotypes that were challenging to categorize as type I (low serum level) or type II (normal serum level, reduced enzymatic function) were characterized in the context of pure FI protein in C3b and C4b fluid phase cleavage assays and a novel bead-based functional assay (BBFA) of C3b cleavage. Four variants predicted or previously characterized as benign were analyzed by BBFA for comparison. In all, three variants (W51S, C67R, and I370T) resulted in low expression. Furthermore, four variants (P64L, R339Q, G527V, and P528T) were identified as being highly deleterious with IC50s for C3b breakdown >1 log increased versus the WT protein, while two variants (K476E and R474Q) were ∼1 log reduced in function. Meanwhile, six variants (P50A, T203I, K441R, E548Q, P553S, and S570T) had IC50s similar to WT. Odds ratios and BBFA IC50s were positively correlated (r = 0.76, p < 0.01), while odds ratios versus combined annotation dependent depletion (CADD) scores were not (r = 0.43, p = 0.16). Overall, 15 CFI RVs were functionally characterized which may aid future patient stratification for complement-targeted therapies. Pure protein in vitro analysis remains the gold standard for determining the functional consequence of CFI RVs.

Comparison of Tetrasodium EDTA 4% with Sodium Citrate 4% as Line-Locking Solutions at 2 Tertiary Hemodialysis Centres.

Background: The patency of central venous catheters (CVCs) in patients undergoing hemodialysis (HD) is maintained by instilling sodium citrate 4% (SC 4%) locking solution. Alteplase, a thrombolytic agent, is administered to restore function if patency is lost. Objective: To compare SC 4% with a new line-locking solution, ethylenediaminetetraacetic acid 4% (EDTA 4%), in terms of CVC patency and alteplase use. Methods: This retrospective chart review included all HD patients who were switched from SC 4% to EDTA 4% locking solution at 2 tertiary HD centres between June and December 2021. Patients were switched to EDTA 4% if they had high usage of alteplase (receiving ≥ 2 doses of alteplase in a 2-week period). For each line-locking agent, HD pump speeds and alteplase use were analyzed over 2 consecutive 12-week periods. Mean serum calcium and ionized calcium values were recorded during each period. A cost analysis was also performed. Results: A total of 37 HD patients were switched to EDTA 4% during the study period. There was no difference in mean HD pump speed between SC 4% and EDTA 4% (307.7 vs 305.1 mL/min, p = 0.48). The number of catheter-use-days on which alteplase was required declined significantly, from 313 days with SC 4% to 94 days with EDTA 4% (p < 0.001), with an overall cost reduction of 34% ($13 183.21). The decrease in alteplase usage was primarily driven by 1 of the 2 sites. A statistically significant decrease in mean ionized calcium at site 2 (from 1.12 to 1.1 mmol/L, p = 0.037) was noted. As well, an intraluminal interaction between EDTA 4% and serum calcium caused 6 cases of low serum calcium. Conclusions: This study showed that use of EDTA 4% as a line-locking agent reduced alteplase usage in the CVCs of HD patients while maintaining adequate pump speed (i.e., ≥ 300 mL/min).

Contexte: La perméabilité des cathéters veineux centraux (CVC) chez les patients hémodialysés (HD) est maintenue en instillant une solution de verrouillage de citrate de sodium à 4 % (CS 4 %). L'alteplase, un agent thrombolytique, est administré pour rétablir la fonction en cas de perte de perméabilité. Objectif: Comparer la solution de CS 4 % et une nouvelle solution de verrouillage, l'acide éthylènediaminetétraacétique 4 % (EDTA 4 %), en termes de perméabilité du CVC et d'utilisation de l'alteplase. Méthodes: Cet examen rétrospectif des dossiers a été réalisé pour tous les patients HD qui sont passés de la solution de verrouillage de CS 4 % à la solution d'EDTA 4 % dans 2 centres d'hémodialyse tertiaires au cours de la période de juin à décembre 2021. Les patients sont passés à l'EDTA 4 % en cas d'utilisation élevée de l'alteplase (≥ 2 doses d'alteplase reçues sur une période de 2 semaines). Pour chaque agent de verrouillage, les vitesses de la pompe d'hémodialyse et l'utilisation de l'alteplase ont été analysées sur 2 périodes consécutives de 12 semaines. Les valeurs moyennes de calcium sérique et de calcium ionisé ont été enregistrées au cours de chaque période. Une analyse des coûts a également été réalisée. Résultats: Au total, 37 patients HD sont passés à l'EDTA 4 % au cours de la période de l'étude. Aucune différence dans la vitesse moyenne de la pompe d'hémodialyse n'a été constatée en cas d'utilisation de la solution de CS 4 % ou d'EDTA 4 % (307,7 c. 305,1 mL/min, p = 0,48). Le nombre de jours d'utilisation du cathéter qui ont nécessité l'utilisation de l'alteplase a diminué de manière significative, passant de 313 jours avec la solution de CS 4 % à 94 jours avec l'EDTA 4 % (p < 0,001); la réduction globale des coûts se montait à 34 % (économies de 13 183,21 $). L'utilisation moins importante de l'alteplase était principalement due à 1 des 2 sites. Une diminution significative du calcium ionisé moyen (1,12 c. 1,1 mmol/L, p = 0,037) a été observée au deuxième site. De plus, une interaction intraluminale entre l'EDTA 4 % et le calcium sérique a provoqué 6 cas d'hypocalcémie. Conclusions: Cette étude a montré que l'utilisation de l'EDTA 4 % comme agent de verrouillage réduisait l'utilisation de l'alteplase dans les CVC des patients HD tout en maintenant une vitesse de pompe adéquate (c'est-à-dire ≥ 300 mL/min).

Association Between the Dialysate Bicarbonate and the Pre-dialysis Serum Bicarbonate Concentration in Maintenance Hemodialysis: A Retrospective Cohort Study.

Background: It is unclear whether the use of higher dialysate bicarbonate concentrations is associated with clinically relevant changes in the pre-dialysis serum bicarbonate concentration. Objective: The objective is to examine the association between the dialysate bicarbonate prescription and the pre-dialysis serum bicarbonate concentration. Design: This is a retrospective cohort study. Setting: The study was performed using linked administrative health care databases in Ontario, Canada. Patients: Prevalent adults receiving maintenance in-center hemodialysis as of April 1, 2020 (n = 5414) were included. Measurements: Patients were grouped into the following dialysate bicarbonate categories at the dialysis center-level: individualized (adjustment based on pre-dialysis serum bicarbonate concentration) or standardized (>90% of patients received the same dialysate bicarbonate concentration). The standardized category was stratified by concentration: 35, 36 to 37, and ≥38 mmol/L. The primary outcome was the mean outpatient pre-dialysis serum bicarbonate concentration at the patient level. Methods: We examined the association between dialysate bicarbonate category and pre-dialysis serum bicarbonate using an adjusted linear mixed model. Results: All dialysate bicarbonate categories had a mean pre-dialysis serum bicarbonate concentration within the normal range. In the individualized category, 91% achieved a pre-dialysis serum bicarbonate ≥22 mmol/L, compared to 87% in the standardized category. Patients in the standardized category tended to have a serum bicarbonate that was 0.25 (95% confidence interval [CI] = -0.93, 0.43) mmol/L lower than patients in the individualized category. Relative to patients in the 35 mmol/L category, patients in the 36 to 37 and ≥38 mmol/L categories tended to have a serum bicarbonate that was 0.70 (95% CI = -0.30, 1.70) mmol/L and 0.87 (95% CI = 0.14, 1.60) mmol/L higher, respectively. There was no effect modification by age, sex, or history of chronic lung disease. Limitations: We could not directly confirm that all laboratory measurements were pre-dialysis. Data on prescribed dialysate bicarbonate concentrations for individual dialysis sessions were not available, which may have led to some misclassification, and adherence to a practice of individualization could not be measured. Residual confounding is possible. Conclusions: We found no significant difference in the pre-dialysis serum bicarbonate concentration irrespective of whether an individualized or standardized dialysate bicarbonate was used. Dialysate bicarbonate concentrations ≥38 mmol/L (vs 35 mmol/L) may increase the pre-dialysis serum bicarbonate concentration by 0.9 mmol/L.

Contexte: On ignore si des concentrations plus élevées de bicarbonate dans le dialysat sont associées à des changements cliniquement significatifs dans le taux de bicarbonate sérique prédialyse. Objectif: Examiner l'association entre la prescription de bicarbonate du dialysat et le taux de bicarbonate sérique prédialyse. Conception: Étude de cohorte rétrospective. Cadre: Étude réalisée en Ontario (Canada) à partir des données administratives de santé. Sujets: Ont été inclus les adultes prévalents qui recevaient une hémodialyse chronique en centre le 1er avril 2020 (n=5 414). Mesures: Les sujets ont été regroupés dans les catégories suivantes de concentration en bicarbonate dans le dialysat utilisée dans leur unité de dialyse: individualisée (ajustée selon le taux de bicarbonate sérique prédialyse) ou normalisée (même concentration pour >90% des sujets). La catégorie « standardisée ¼ a été stratifiée selon la concentration: 35 mmol/L, 36 à 37 mmol/L et ≥38 mmol/L. Le principal critère d'évaluation était le taux moyen de bicarbonate sérique prédialyse en ambulatoire au niveau du patient. Méthodologie: Nous avons examiné l'association entre la catégorie de concentration en bicarbonate du dialysat et le taux de bicarbonate sérique prédialyse à l'aide d'un modèle linéaire mixte corrigé. Résultats: Pour toutes les catégories de concentration en bicarbonate du dialysat, le taux moyen de bicarbonate sérique prédialyse était dans la plage normale. Dans la catégorie « individualisée ¼, 91% des sujets avaient un taux de bicarbonate sérique prédialyse de ≥22 mmol/L, comparativement à 87% dans la catégorie « standardisée ¼. Les patients de la catégorie « standardisée ¼ tendaient à avoir un taux de bicarbonate sérique de 0,25 mmol/L (IC 95%: -0,93 à 0,43) inférieur à celui des patients de la catégorie « individualisée ¼. Comparé aux patients de la catégorie 35 mmol/L, les patients des catégories 36 à 37 mmol/L et ≥38 mmol/L tendaient respectivement à avoir un taux de bicarbonate sérique de 0,70 mmol/L (IC 95%: -0,30 à 1,70) et de 0,87 mmol/L (IC 95%: 0,14 à 1,60) plus élevé. L'âge, le sexe ou les antécédents de maladie pulmonaire chronique n'ont pas semblé modifier l'effet. Limites: Il n'a pas été possible de confirmer directement que toutes les mesures de laboratoire avaient été effectuées avant la dialyse. Les données sur les concentrations de bicarbonate prescrites pour les séances de dialyse individuelles n'étaient pas disponibles, ce qui peut avoir conduit à une classification erronée. De plus, l'observance d'une pratique d'individualisation n'a pas pu être mesurée. Une confusion résiduelle est possible. Conclusion: Nous n'avons observé aucune différence significative dans les taux de bicarbonate sériques prédialyse, qu'on ait utilisé une concentration individualisée ou standardisée de bicarbonate dans le dialysat. L'utilisation d'un dialysat à ≥38 mmol/L (c. 35 mmol/L) de bicarbonate peut entraîner une hausse de 0,9 mmol/L du taux de bicarbonate sérique prédialyse.

Identification and quantification of chain-pairing variants or mispaired species of asymmetric monovalent bispecific IgG1 monoclonal antibody format using reverse-phase polyphenyl chromatography coupled electrospray ionization mass spectrometry.

Developing a knob-into-hole asymmetric bispecific IgG1 monoclonal antibody (mAb) poses manufacturing challenges due to the expression of chain pairing variants, also called mispaired species, in the desired product. The incorrect pairing of light and heavy chains could result in heterogeneous mispaired species of homodimers, heterodimers, light chain swapping, and low molecular weight species (LMWS). Standard chromatography, capillary electrophoretic, or spectroscopic methods poorly resolve these from the main variants. Here, we report a highly sensitive reverse-phase polyphenyl ultra-high-performance liquid chromatography (RP-UHPLC) method to accurately measure mispaired species of Duet mAb format, an asymmetric IgG1 bispecific mAb, for both process development and quality control analytical tests. Coupled with electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS), it enabled direct online characterization of mispaired species. This single direct assay detected diverse mispaired IgG-like species and LMWS. The method resolved eight disulfide bonds dissociated LMWS and three mispaired LMWS. It also resolved three different types of IgG-like mispaired species, including two homodimers and one heterodimer. The characterization and quantification simultaneously enabled the cell line selection that produces a lesser heterogeneity and lower levels of mispaired species with the desired correctly paired product. The biological activity assessment of samples with increased levels of these species quantified by the method exhibited a linear decline in potency with increasing levels of mispaired species in the desired product. We also demonstrated the utility of the technique for testing in-process intermediate materials to determine and assess downstream purification process capability in removing diverse mispaired IgG-like species and LMWS to a certain level during the downstream purification process. Our investigation demonstrates that adopting this method was vital in developing asymmetric bispecific mAb from the initial stage of cell line development to manufacturing process development. Therefore, this tool could be used in the control strategy to monitor and control mispaired species during manufacturing, thus improving the quality control of the final product.